硕士论文-HPLC-ICP-MS研究大鼠体内的汞结合蛋白
文献类型：学位论文
| 作者 | 史俊稳 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 2006 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 授予地点 | 北京 |
| 导师 | 丰伟悦 |
| 关键词 | 同位素示踪 HPLC-ICP-MS 柱后同位素稀释 汞结合蛋白 |
| 学位专业 | 无机化学 |
| 中文摘要 | 汞的生物毒性主要源于其与生物体内蛋白质或多肽中巯基的高度结合，胚胎早期低剂量汞暴露对后代的毒性影响是目前汞毒理学研究的热点。本论文采用同位素示踪、HPLC-ICP-MS、HPLC-ICP-IDMS、SDS-PAGE、MALDI-TOF-MS等相关技术和方法，对胚胎早期低剂量甲基汞暴露的母仔鼠血清样品以及脑、肝、肾组织胞液中的汞结合蛋白进行了研究。本实验结果表明，同位素示踪与HPLC-ICP-MS柱后同位素稀释技术相结合，可为生物组织样品中低丰度的汞结合蛋白以及其它微量元素种态的研究提供一套准确、可靠的分析方法，该方法在体内微量元素化合物以及金属蛋白组分领域有很好的应用前景。富集的196Hg、198Hg示踪可以提高汞结合蛋白检测的灵敏度，亦可以排除外源汞的干扰鉴别虚假的汞结合蛋白峰，确保汞结合蛋白分析的真实性，有利于生物样品中低丰度的汞结合蛋白的研究。实验中采用HPLC-ICP-IDMS柱后同位素稀释技术定量计算了母、仔鼠脑胞液中与蛋白结合的汞量，并与直接消化处理后通过同位素稀释法所测定的结果作了比较，得到了满意的回收率。结果显示，虽然母仔鼠脑组织胞液中汞结合蛋白的分布模式基本一致，但不同含汞蛋白结合的汞量在脑胞液中的相对百分含量存在明显差异。; 母仔鼠血清及脑、肝、肾组织细胞质胞液的HPLC-ICP-MS研究表明，母仔鼠血清样品中汞结合蛋白的分布模式一致。血清中的汞主要与血清白蛋白结合，其次与IgG洗脱时间一致的蛋白和一分子量约300 kD的未知蛋白组分相结合。母仔鼠脑胞液中汞结合蛋白的分布模式基本一致，脑胞液中汞主要与MTs类蛋白结合。汞结合蛋白在母仔鼠肝胞液中的分布存在显著差异。在仔鼠肝胞液中汞仅与MTs类蛋白结合，然而，在母鼠肝胞液中除与一分子量为35.5 kD亦含Cu、Zn的类MTs蛋白结合外，还与2个大分子量的未知蛋白结合。经早期胚胎甲基汞暴露后，母鼠肾胞液中汞除与MTs类蛋白结合外，还与2个大分子量的同时含Cu、Zn的蛋白结合，而仔鼠肾胞液中并未发现汞结合蛋白。; SDS-PAGE、MALDI-TOF-MS和HPLC-ICP-MS的研究结果表明，相比加热变性和乙醇-氯仿沉淀提纯MTs的方法，乙腈沉淀法处理组织胞液后，得到了纯度更高的MTs组分。而且经乙腈处理得到的MTs蛋白分子与金属（Cu、Zn、Cd、Hg）的结合形态并不会发生改变，有利于MTs与各类金属相互作用的研究。乙腈去除杂蛋白后，大鼠脑、肝、肾组织胞液的MTs组分中均含有MTs（6048/6162D）组分以及分子量为8403D、9872D的蛋白组分。另外在肾胞液提取液中还有一分子量为10734D的蛋白存在。相比肝、肾样品，脑样品中还有一分子量为6809蛋白存在，与Swiss-Prot数据库中未修饰的大鼠MT-3的平均分子量相符。 |
| 学科主题 | 无机化学 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2016-02-25 |
| 源URL | [http://ir.ihep.ac.cn/handle/311005/209493]  |
| 专题 | 多学科研究中心_学位论文和出站报告 |
| 作者单位 | 中国科学院高能物理研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 史俊稳. 硕士论文-HPLC-ICP-MS研究大鼠体内的汞结合蛋白[D]. 北京. 中国科学院研究生院. 2006. |
入库方式： OAI收割
来源：高能物理研究所
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