口蹄疫灭活病毒疫苗分离纯化工艺研究
文献类型：学位论文
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| 作者 | 李浩 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 2015-05 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 导师 | 苏志国 ; 张松平 |
| 关键词 | 口蹄疫灭活病毒疫苗 分离纯化 疏水色谱 离子交换色谱 凝胶过滤色谱 |
| 学位专业 | 生物化工 |
| 中文摘要 | 口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种偶蹄动物急性传染病，近年来，口蹄疫疫情在世界范围内造成了极其严重的经济损失。目前，疫苗接种是唯一能够控制口蹄疫疫情的方法，但疫苗的生产工艺尚存在一些问题。口蹄疫疫苗的分离纯化方法尚停留在活病毒提取阶段，选择性差，产品纯度较低，难以适应新型灭活病毒疫苗的生产需要。针对以上问题，本论文尝试建立一种能够适用于工业生产的新型色谱分离纯化工艺，主要包括以下内容： （1）筛选了离子交换色谱以及凝胶过滤等分离介质，得到了分离效果较好的色谱介质；并通过合理组合建立了Sephacryl-S400凝胶过滤色谱偶联DEAE Sepharose FF离子交换色谱的纯化工艺。该工艺口蹄疫灭活病毒的纯化倍数达到217倍，收率为37.5%。 （2）筛选了疏水层析色谱以及凝胶过滤等分离介质，得到了分离效果较好的色谱介质；根据介质筛选结果，建立了Butyl Sepharose 4FF疏水色谱结合Superdex 200凝胶过滤色谱的纯化工艺，该工艺口蹄疫灭活病毒的纯化倍数达到247倍，口蹄疫病毒的收率为75.4%，宿主DNA的去除率达到99.5%。 （3）运用多种检测方法对病毒灭活病毒纯品的结构和形态进行鉴定，通过凝胶过滤高效液相色谱偶联多角度激光散射仪检测其分子量，发现完整的病毒的分子量为5.6*107 Da；同时波长扫描发现其最大吸收波长为259nm，均与文献报道一致；通过激光粒度仪进一步对口蹄疫灭活病毒的直径进行检测，发现其直径为28nm；透射电镜观察结果表明，口蹄疫灭活病毒为30 nm左右的球形颗粒，其形态大小与通过蔗糖密度梯度离心所制备的标准品一致。 本论文建立了新型口蹄疫灭活疫苗的分离纯化工艺，该工艺具有能耗少、回收率高、适合工业应用的特点，同时所得口蹄疫灭活疫苗产品的纯度高，结构完整；为大规模制备口蹄疫灭活病毒疫苗奠定了基础。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2016-05-03 |
| 源URL | [http://ir.ipe.ac.cn/handle/122111/20302]  |
| 专题 | 过程工程研究所_研究所（批量导入） |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 李浩. 口蹄疫灭活病毒疫苗分离纯化工艺研究, Purification strategy of inactivated Foot-and-Mouth Disease Virus[D]. 中国科学院研究生院. 2015. |
入库方式： OAI收割
来源：过程工程研究所
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