高纯度沙棘Vp制备及其心血管活性研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 杨芳 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2016 |
| 授予单位 | 中国科学院大学 |
| 授予地点 | 北京 |
| 导师 | 索有瑞 |
| 关键词 | 沙棘 Vp 制备工艺 心血管 药理活性 |
| 中文摘要 | 沙棘(Hippophae rhamnoides L.)是胡颓子科(Elaeagnaceae)沙棘属(Hippophae)的落叶灌木或乔木，广泛分布于欧亚大陆温带地区，是一种重要的中藏药材，具有悠久的药用历史，同时，沙棘也是青海省重要的生态经济林浆果植物。根据研究，沙棘中除含有大量的维生素、脂肪酸以及微量元素等营养成分以外，还含有丰富的黄酮及多酚类活性成分，具有抗氧化、降血脂、降血糖、保护心血管等功效。 沙棘Vp是以沙棘中生物类黄酮为主要成分的有效物质群，其主要成分为儿茶素、白花青素、花青素等多酚类和黄酮类化合物，沙棘 Vp 具有增强毛细血管壁韧性、保护血管、降血脂等功效。为了进一步研究沙棘 Vp 的活性成分以及药理作用机制，本论文对沙棘果实进行了高纯度沙棘 Vp 的制备以及心血管活性机制的研究，取得了以下的结果和结论。 1、利用单因素结合响应面的实验方法确定了沙棘 Vp 的提取工艺。通过单因素实验筛选超声时间、超声温度、料液比、乙醇体积分数四个主要因素，以沙棘 Vp 提取得率为响应值进行 Box-behnken 中心组合实验设计，建立沙棘 Vp 提取得率的最佳提取工艺。结果表明，在超声时间 2.5h，超声温度为 65℃，料液比为 1:4，乙醇体积分数为55％的条件下，沙棘Vp平均提取得率为9.02%±0.03%，与模型预测值基本吻合。 2、利用大孔吸附树脂对提取所得的沙棘 Vp 进行了纯化工艺研究。实验采用了AB-8、D101、HPD-100、HPD-600、HPD-826 五种大孔吸附树脂，考察了五种大孔吸附树脂的吸附性能和对沙棘 Vp 的纯化能力。实验结果表明，HPD-100、HPD-826、HPD-600、D101、AB-8 五种树脂均具有纯化沙棘 Vp 的作用，其中，D101 型大孔吸附树脂对沙棘 Vp 的纯化能力最佳，最终的纯化工艺流程为：上样量为 4BV，室温下吸附 1h，选用 60-80%乙醇进行洗脱，解析，收集洗脱液，便可得到纯度在 90%以上的沙棘 Vp 提取物。 3、沙棘Vp中的活性成分表征。利用质谱以及高分辨质谱对沙棘Vp进行成分的化学结构表征，根据化合物的紫外图谱以及质谱数据，对照文献推测其中两种化合物分别为异鼠李素-3-O-芸香糖苷(Isorhamnetin-3-O-rutinoside)，异鼠李素-3-O-葡萄糖苷(Isorhamnetin-3-O-glucoside)。 4、不同工艺制备沙棘 Vp 降血脂功能比较。利用高血脂大鼠模型，沙棘 Vp、企业提供沙棘 Vp、沙棘 Vp+Vc 为受试药物，检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)以及低密度脂蛋白(LDL)，分析沙棘 Vp 对体重和脏器指数的影响。比较三个样品的降血脂功效，评价沙棘 Vp 与 Vc 的协同作用。结果表明，本实验室纯化的沙棘 Vp 的降血脂功效显著优于沙棘 Vp 产品，经过纯化的沙棘 Vp 具有更高效的生物活性。此外，沙棘 Vp 与 Vc 具有协同降血脂的功效。 5、体外血管环实验考察沙棘 Vp 对高血脂大鼠主动脉血管内皮功能的影响。建立高血脂大鼠模型，灌胃给予沙棘 Vp，取大鼠主动脉，制备血管环，采用体外恒温组织浴槽及多导生理记录仪进行体外血管环实验，检测内皮依赖性血管舒张功能及非内皮依赖性血管舒张功能，同时检测一氧化氮合酶(NOS)底物左旋精氨酸(L-arginine，L-arg)或抑制剂 Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(Nω-Nitro-L-Arginine Methyl Ester，L-NAME)对内皮依赖性血管舒张功能影响。结果显示：模型组大鼠主动脉血管环对乙酰胆碱(acetylcholine，Ach)的内皮依赖性舒张功能明显降低，这种舒张可完全被 NOS 抑制剂L-NAME 阻断，NOS 底物 L-arg可改善模型组大鼠主动脉血管环的舒张功能，而沙棘Vp 对高血脂症大鼠主动脉内皮完整有保护作用。 6、沙棘 Vp 降血脂及血管保护的分子机制研究。利用高血脂大鼠模型，灌胃给予沙棘 Vp；HE 染色法观察血管及肝脏形态，电镜观察血管内皮及平滑肌细胞形态。采用 TBA 比色法检测肝脏及血清丙二醛(MDA)含量、WST-1 法检测肝脏及血清超氧化物歧化酶(SOD)活力、检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)以及低密度脂蛋白(LDL)。Elisa 方法检测血管内皮生长因子(VEGF)、血管细胞粘附因子(VCAM-1)、心肌肌钙蛋白(cTnI)、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)和白细胞介素(IL-6)。Western blot 和 PCR 法检测主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)、细胞间黏附分子(ICAM-1)的蛋白和 mRNA 表达水平。结果表明，沙棘 Vp在 7–28mg/kg的剂量下，可以显著改善高血脂大鼠血清血脂水平，可以显著增高肝脏及血清 SOD 活力，降低肝脏及血清 MDA 含量，降低 VEGF、VCAM-1、TNF-α、IL-6的表达，降低主动脉 eNOS、iNOS、LOX-1、ICAM-1 的蛋白及 mRNA 水平。说明沙棘 Vp 可以有效保护由高血脂症引起的血管内皮功能紊乱。 |
| 学科主题 | 植物学 |
| 语种 | 中文 |
| 源URL | [http://ir.nwipb.ac.cn/handle/363003/5902]  |
| 专题 | 西北高原生物研究所_中国科学院西北高原生物研究所 |
| 作者单位 | 中国科学院西北高原生物研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 杨芳. 高纯度沙棘Vp制备及其心血管活性研究[D]. 北京. 中国科学院大学. 2016. |
入库方式： OAI收割
来源：西北高原生物研究所
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