高速逆流色谱(High-speed counter-current chromatography, HSCCC)是一种不需要固相载体的液-液分配色谱技术，其固定相和流动相均为液相。HSCCC具有样品回收率高、样品负载量大、不易使样品发生变性和无不可逆吸附等优点，已广泛地应用于多种天然产物的分离和纯化。本研究应用HSCCC对锁阳和枸杞中的清除自由基活性成分进行分离。由于HSCCC是依据物质在两相中分配系数的不同而进行分离的色谱技术，在面对复杂样品基质中结构相似、分配系数相近的化合物时，分离效果往往不能令人满意。本研究对与HSCCC分离柱材质相同的聚四氟乙烯(Polytetrafluoroethylene, PTFE)薄膜进行表面修饰，以3种黄酮类化合物为模板分子对修饰所得材料的吸附性能进行评价。研究结果可为制备兼具分配色谱和吸附色谱的HSCCC新型PTFE分离柱提供科学依据，并为实现复杂样品基质中结构相似、分配系数相近的物质的高效分离奠定基础。 具体研究内容如下：

1. 建立了一种基于DPPH•-HPLC-HSCCC技术筛选和分离制备锁阳中具有清除自由基活性成分的方法。在具有目标导向的DPPH•-HPLC实验中，筛选出了3种具有清除自由基活性的物质。以乙酸乙酯–水(1:1, v/v)为两相溶剂体系，应用HSCCC对这3种物质进行分离和纯化，从600 mg样品中分离得到了14.3 mg儿茶素、15.2 mg表儿茶素和11.3 mg橄榄苦苷，纯度分别为97.8%, 98.3%和95.6%，其中橄榄苦苷为首次从锁阳中分离得到。本研究中所用的HSCCC方法和HPLC方法均为反相模式，然而3种目标化合物在HSCCC 图谱和HPLC图谱中的出峰顺序完全相反。研究表明：在HSCCC分离中，3种化合物的洗脱顺序是由其疏水性决定的；而在HPLC分离中，其洗脱可能受到色谱柱固定相与化合物之间其它作用力的影响，如氢键和立体效应。HSCCC分离所得化合物的清除自由基活性通过 DPPH•法进行评价，3种化合物均表现出较强的清除自由基活性，儿茶素、表儿茶素和橄榄苦苷的EC₅₀值分别为16.97±0.02、11.15±0.09和41.32±0.20 μg•mL^-1。

2. 建立了一种HSCCC 双相洗脱的方法用于枸杞中极性范围较广的几种物质的分离制备。以正丁醇–乙酸乙酯–水(4:1:5, v/v/v)为两相溶剂体系，分离首先以上相为固定相，应用从“头”到“尾”的模式向柱中泵入下相为流动相对样品进行洗脱，得到了2种化合物。当仪器运行180 min后，将分离柱的进口和出口相互转换，应用从“尾”到“头”的模式向柱中泵入上相为流动相对样品进行洗脱，原先柱中的流动相即成为固定相，原先在柱中具有强保留物质则能被较快洗脱出来，在这一分离步骤中得到了1种化合物。化合物的结构经¹H NMR 和¹³C NMR 鉴定分别为5-羟甲基糠醛、芦丁和槲皮素，纯度分别为94.8%、96.5%和 95.0%。HSCCC分离所得化合物的清除自由基活性通过DPPH•法进行评价，其中，芦丁和槲皮素表现出较强的清除自由基活性，EC₅₀值分别为20.07±0.10和3.11±0.03 μg•mL^-1。

3. 建立了一种基于钠-萘处理和多巴胺涂敷技术的PTFE薄膜表面修饰的方法。PTFE薄膜首先通过钠-萘溶液处理以提高其表面的亲水性，然后通过自组装的方法进行多巴胺涂敷，修饰所得材料通过X-射线光电子能谱、扫描电子显微镜和傅里叶变换红外光谱进行表征。以3种黄酮类化合物(槲皮素、山奈酚、木犀草素)为模板分子对材料的吸附性能进行评价，并对吸附机理进行探讨。研究表明，材料表面被引入的基团与模板分子形成氢键的能力对材料的吸附能力具有一定的影响。 模板分子羟基的个数及模板分子形成分子内氢键的能力是影响材料对其吸附量的主要因素。