三叶因子Bm-TFF2突变体在原核体系中的表达及促细胞迁移活性
文献类型：期刊论文
| 作者 | 余果宇1,2; 向阳1,3; 张红芸4; 江萍1; 李文辉1; 张云1; 张勇[*]1 |
| 刊名 | 动物学研究
 |
| 出版日期 | 2011 |
| 卷号 | 32期号:4页码:379-385 |
| 关键词 | Bm-TFF2 突变体 表达 纯化 细胞迁移 |
| 其他题名 | Expression of Bm-TFF2 mutants in Escherichia coli and their cell migration-promoting activity |
| 通讯作者 | zhyong@mail.kiz.ac.cn |
| 合作状况 | 其它 |
| 中文摘要 | 大蹼铃蟾三叶因子Bm-TFF2具有较人TFF2更强的促细胞迁移和抗凋亡活性。该研究利用RT-PCR方法扩增得到野生型Bm-TFF2的基因,然后分别构建N端、C端和分子中两个精氨酸突变的突变体,最后连接表达载体产生pET32a(+)/Bm-TFF2突变型重组质粒,转入大肠杆菌中,经37℃培养,IPTG诱导,其融合蛋白主要存在于包涵体中,用组氨酸标签的亲合柱纯化溶解后的包涵体上清,进一步用RP-HPLC纯化得到硫氧还蛋白(TRX)/Bm-TFF2突变型融合蛋白。通过SDS-PAGE和Westernblotting检测分析其纯度和特异性。最终,从1L培养基中得到20mg纯度为95%的三种重组突变型融合蛋白。三种突变型重组蛋白都具有剂量依赖性的促细胞迁移活性,并且其活性无显著差异。该研究为进一步研究Bm-TFF2结构和功能的关系以及揭示其作用的分子机制奠定了基础。 |
| 英文摘要 | Bm-TFF2, a trefoil factor from the large-webbed bell toad (Bombina maxima), can stimulate cell migration and inhibit cell apoptosis. To study the structure-function relationship of Bm-TFF2, we constructed wild-type and mutated Bm-TFF2 plasmids and expressed recombinant proteins in E. coli. The wild-type Bm-TFF2 gene encoding mature peptide was obtained by RT-PCR, while the N-terminal, C-terminal and two arginine mutated Bm-TFF2 clones were constructed, and ligated into pET-32a(+) expression vectors. The fusion proteins were induced by IPTG at 37°C. The mutant Bm-TFF2 fusion proteins expressed mainly in the inclusion bodies. The mutant (TRX)/Bm-TFF2 could be purified by using Ni 2+ -chelating chromatography and reverse-phase HPLC from the inclusion body supernatant. The fusion proteins were analyzed by SDS-PAGE and Western blotting. The yield of mutant Bm-TFF2 fusion proteins of above 95% purity was about 20 mg/L. All three recombinant mutant proteins can promote the migration of AGS cells in a dose-dependent manner with no obvious activity difference. |
| 收录类别 | CSCD |
| 资助信息 | 中国科学院“西部之光”(Y102291081);“973”项目(2010CB529800);国家基金委面上项目(30870304). |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2012-09-14 |
| 源URL | [http://159.226.149.42:8088/handle/152453/7101]  |
| 专题 | 昆明动物研究所_动物活性蛋白多肽组学 昆明动物研究所_动物模型与人类重大疾病机理重点实验室 |
| 作者单位 | 1.中国科学院昆明动物研究所 动物模型与人类疾病机理重点实验室, 云南 昆明 650223 2.昆明医学院 生物化学教研室, 云南昆明650500 3.中国科学院研究生院, 北京100049 4.昆明医学院 第一附属医院妇产科, 云南昆明 650032 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 余果宇,向阳,张红芸,等. 三叶因子Bm-TFF2突变体在原核体系中的表达及促细胞迁移活性[J]. 动物学研究,2011,32(4):379-385. |
| APA | 余果宇.,向阳.,张红芸.,江萍.,李文辉.,...&张勇[*].(2011).三叶因子Bm-TFF2突变体在原核体系中的表达及促细胞迁移活性.动物学研究,32(4),379-385. |
| MLA | 余果宇,et al."三叶因子Bm-TFF2突变体在原核体系中的表达及促细胞迁移活性".动物学研究 32.4(2011):379-385. |
入库方式： OAI收割
来源：昆明动物研究所
浏览0
下载0
收藏0
其他版本
除非特别说明，本系统中所有内容都受版权保护，并保留所有权利。