眼镜王蛇蛇毒金属蛋白酶的分离鉴定和分子克隆
文献类型：学位论文
| 作者 | 郭晓汐 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 2006-06 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 授予地点 | 北京 |
| 导师 | 张云 |
| 关键词 | 眼镜王蛇 金属蛋白酶 血小板 纤维蛋白原 |
| 学位专业 | 生物化学与分子生物学 |
| 中文摘要 | 摘 要 蛇毒金属蛋白酶(SVMPs)被认为是出血性蛇毒中的重要成分，是一个包括多种类型成员的家族，它们在结构上表现出较大的多样性，有的蛇毒金属蛋白酶除了含有酶结构以外在羧基端还添加了更多的结构，如：去整合素样结构域、富含半胱氨酸结构域、外源凝集素结构域，这种结构多样性导致了蛇毒金属蛋白酶生物活性上的多样性。眼镜蛇科中的蛇毒主要以神经毒为主，对其金属蛋白酶成分的研究比较少，本文以眼镜王蛇蛇毒中的金属蛋白酶为研究对象，探讨了它的生物活性、结构特点,为我们深入了解蛇毒金属蛋白酶结构与功能的关系提供了新的研究信息。 首先，通过分子筛凝胶过滤、阴离子交换和肝素亲合层析，我们从梧州产眼镜王蛇(Ophiophagus hannah)蛇毒中纯化到一个表观分子量为55,000Da的单链蛋白，测定了其N端序列为SQKKDFLEEKKYLELYIVADYVMFR，与其它蛇毒金属蛋白酶的N端序列相似性较高，命名为Ohagin。接下来我们研究了该蛋白对纤维蛋白原的作用，发现Ohagin能专一性地降解人源纤维蛋白原的α-链，其降解活性能被EDTA完全抑制，但不被PMSF所抑制，说明该蛋白酶为金属蛋白酶。Ohagin能抑制TMVA诱导的血小板聚集，并且这种抑制效应是剂量依赖性的。我们通过cDNA克隆、蛋白质测序和肽指纹图谱方法确定了Ohagin的蛋白质序列，Ohagin的cDNA序列编码一个611氨基酸长度的开放阅读框，包括信号肽、前肽和成熟蛋白所含有的金属蛋白酶结构域、去整合素样结构域以及富含半胱氨酸结构域，根据这一结构特点，把Ohagin归为P-III型蛇毒金属蛋白酶。将Ohagin蛋白质序列与P-Ⅲ型蛇毒金属蛋白酶家族中有代表性的22种毒素蛋白序列进行比对和进化树分析后发现Ohagin与P-Ⅲa型、P-Ⅲb型和P-Ⅲc型的蛇毒金属蛋白酶的亲缘关系较远，而与眼镜蛇科已知的几种金属蛋白酶亲缘关系较近，推测它们的生物活性也类似，有可能属于新的P-III型蛇毒金属蛋白酶亚家族。 关键词：眼镜王蛇；金属蛋白酶；血小板；纤维蛋白原。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-10-14 |
| 源URL | [http://159.226.149.42:8088/handle/152453/6134]  |
| 专题 | 昆明动物研究所_动物活性蛋白多肽组学 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 郭晓汐. 眼镜王蛇蛇毒金属蛋白酶的分离鉴定和分子克隆[D]. 北京. 中国科学院研究生院. 2006. |
入库方式： OAI收割
来源：昆明动物研究所
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