利用修饰的随机引物构建非洲爪蟾酵母双 杂交定向 cDNA 文库
文献类型：期刊论文
| 作者 | 武景阳1,2; 李朝翠1; 孔清华1,2; 毛炳宇[*]1 |
| 刊名 | 动物学研究
 |
| 出版日期 | 2008 |
| 卷号 | 29期号:4页码:368-372 |
| 关键词 | 非洲爪蟾 酵母双杂交 随机引物 定向 cDNA 文库 |
| 其他题名 | Construction and Analysis of A Directional Xenopus laevis Embryonic cDNA Library for Yeast Two-hybrid Using Modified Random Primers |
| 通讯作者 | mao@mail.kiz.ac.cn |
| 合作状况 | 其它 |
| 中文摘要 | 描述了一种新的构建cDNA文库的方法，其中用来合成cDNA第一链的随机引物5’．端被加上碱基d（AC），在cDNA双链合成后所添加的连接头的末端含有碱基d（GTCG）。在cDNA双链3’-端，连接头连接上后会形成一个完整的Sall酶切位点d（GTCGAC），而在5’．端几乎不会形成Sall位点。在勋盯酶切后利用形成的3’-粘性末端与5’-EcoRI粘性末端一起将cDNA双链定向导入线性化的质粒载体，再通过转化细菌获得cDNA文库。利用此方法构建了一个不同发育时期非洲爪蟾胚胎酵母双杂交cDNA文库。检测了文库中空载体的比例，插入片段大小和不同基因的表达水平几个指标，都符合预期，但是同时发现定位于mRNA的3’-端的插入片段比例比较低。这种倾向性符合文献报道，应该是实验系统的倾向性，不影响进一步的酵母双杂交实验。这些数据证明成功地构建了定向非洲爪蟾酵母双杂交cDNA文库。 |
| 英文摘要 | Here we describe a new strategy for eDNA library construction, in which the random primers directing the first strand eDNA synthesis contain additional d （AC） at their 5＇-ends, and the linkers which will be added to the double strand eDNA contain d（GTCG） at the 5＇-ends. When the linker is added to the 3＇-end of the eDNA, a complete SalI site d（GTCGAC） will form at the 3＇-end but not at the 5＇-end of the eDNA fragment. After Sall digestion, the T-cohesive and the pre-existing 5＇-EcoRI cohesive ends are used to introduce the double stranded cDNA into the linearized plasmid vectors. The ligation products were used to transform E.coli to produce a cDNA library. Using this method, we constructed a directional Xenopus laevis embryonic eDNA library for yeast two-hybrid. We checked the ratio of empty vectors, the size of inserts and existence of several genes, the results showed that eDNA library construction was successful. |
| 收录类别 | 其他 |
| 资助信息 | 国家杰出青年科学基金(30425011);国家自然科学基金重点项目(30530380) . |
| 语种 | 中文 |
| 源URL | [http://159.226.149.26:8080/handle/152453/9713]  |
| 专题 | 昆明动物研究所_发育生物学 昆明动物研究所_遗传资源与进化国家重点实验室 |
| 作者单位 | 1.中国科学院昆明动物研究所 遗传资源与进化国家重点实验室,云南昆明 650223 2.中国科学院研究生院,北京100049 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 武景阳,李朝翠,孔清华,等. 利用修饰的随机引物构建非洲爪蟾酵母双 杂交定向 cDNA 文库[J]. 动物学研究,2008,29(4):368-372. |
| APA | 武景阳,李朝翠,孔清华,&毛炳宇[*].(2008).利用修饰的随机引物构建非洲爪蟾酵母双 杂交定向 cDNA 文库.动物学研究,29(4),368-372. |
| MLA | 武景阳,et al."利用修饰的随机引物构建非洲爪蟾酵母双 杂交定向 cDNA 文库".动物学研究 29.4(2008):368-372. |
入库方式： OAI收割
来源：昆明动物研究所
浏览0
下载0
收藏0
其他版本
除非特别说明，本系统中所有内容都受版权保护，并保留所有权利。