切除GST标签的重组蛋氨酸酶及多抗制备
文献类型：期刊论文
| 作者 | 张芳1; 任晓丽1; 罗得华1; 罗沈强1; 王文举2; 张华堂2; 田长富[*]1 |
| 刊名 | 昆明医科大学学报
 |
| 出版日期 | 2013 |
| 卷号 | 34期号:3页码:8-11 |
| 关键词 | 蛋氨酸酶GST标签 多抗制备 |
| 其他题名 | Production of L-Methionine Gamma-lyase and Polyclonal Antibody with Cleaved GST Tag |
| 通讯作者 | maihtiancf@21cn.com |
| 合作状况 | 其它 |
| 中文摘要 | 目的优化表达条件后纯化出切除GST标签的Met-PGEX-4T-1蛋白,制备出假单胞菌来源的多克隆抗体.方法将蛋氨酸酶(L-methionine gamma-lyase,Me)t的基因克隆至pBSK载体中,形成重组质粒pBSK-Met,采用基因工程技术将pBSK-Met与PGEX-4T-1载体连接,形成Met-PGEX.利用大肠杆菌表达系统诱导表达出Met-PGEX,采用亲和层析法过柱纯化Met-PGEX,凝血酶切除分子量为26KD的GST标签,免疫新西兰兔制备出蛋氨酸酶多克隆抗体Met PcAb,双向免疫扩散实验测多克隆抗体效价为1:128,间接Elisa法测效价1:1×105.结果成功表达纯化出纯度大于90%的Met-PGEX并制备出多克隆抗体.结论所制备的多克隆抗体可用于检测不同来源重组蛋氨酸酶抗原差异性变化. |
| 英文摘要 | Objective To optimize the expression conditions,purify Metase-PGEX-4T-1 protein cleaved GST tag and product polyclonal antibody by Pseudomonas putida.Methods Recombinant plasmid of pBSK-Metase was obtained by combining L-methionine gamma-lyase and PBSK.Met-PGEX was prepared connecting to PBSK-Metase and PGEX-4T-1 by using gene engineering technique.Met-PGEX was expressed inducible by Escherichia coli expression system.The expressed protein was purified by GST SefinoseTM Resin affinity chromatography.The GST tag with the relative molecular mass of 26KD was cleaved by thrombin.The titer of new Zealand white rabbit antisrum was 1：128 on double immunodiffusion,and up to 1：1×105by indirect ELISA.Results The Met-PGEX with a purity of over 90% was successfully expressed and purified.Conclusions The polyclonal antibody prepared could be used to detect the changes from different origin recombinant L-methionine gamma-lyase. |
| 收录类别 | 其他 |
| 资助信息 | 国家自然科学基金资助项目(30760287);云南省科技厅自然科学基金资助项目(2009CC022). |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2013-09-13 |
| 源URL | [http://159.226.149.42:8088/handle/152453/7629]  |
| 专题 | 昆明动物研究所_分子免疫生物学 |
| 作者单位 | 1.昆明医科大学生物医学工程研究中心,基因与蛋白质工程研究室,云南昆明650500 2.中国科学院昆明动物研究所,云南昆明650223 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 张芳,任晓丽,罗得华,等. 切除GST标签的重组蛋氨酸酶及多抗制备[J]. 昆明医科大学学报,2013,34(3):8-11. |
| APA | 张芳.,任晓丽.,罗得华.,罗沈强.,王文举.,...&田长富[*].(2013).切除GST标签的重组蛋氨酸酶及多抗制备.昆明医科大学学报,34(3),8-11. |
| MLA | 张芳,et al."切除GST标签的重组蛋氨酸酶及多抗制备".昆明医科大学学报 34.3(2013):8-11. |
入库方式： OAI收割
来源：昆明动物研究所
浏览0
下载0
收藏0
其他版本
除非特别说明，本系统中所有内容都受版权保护，并保留所有权利。