树突状细胞与HIV-1 辅助蛋白相互作用的体外研究——新的实验体系的建立与应用
文献类型：学位论文
| 作者 | 陆小鹏 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 2008-06 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 授予地点 | 北京 |
| 导师 | 张华堂 |
| 关键词 | HIV/AIDS 辅助蛋白 树突状细胞 单核细胞 载体构建 DNA 和mRNA 转染 表型 凋亡 |
| 中文摘要 | 树突状细胞（DC）是免疫系统中具有多种免疫功能的关键细胞，但在HIV/AIDS患者体内，虽有大量病毒及抗原存在，却不能有效地激发特异性免疫应答。最新的研究显示，HIV/AIDS血源和性传染的途径虽有不同，但DC均是早于T细胞而最先遭受感染的“第一靶细胞”。已知辅助蛋白（Nef、Rev、Tat、Vif、Vpr和Vpu）是HIV-1在宿主细胞内复制和致病的根本因素。而哪种辅助蛋白、如何影响DC功能，至今研究结果甚少，结论杂乱不一。 本论文作为HIV-1影响DC功能研究的实验体系部分，旨在为系统比较研究6个辅助蛋白对DC功能的调节和机理奠定基础。采用分子生物学和免疫学技术方法，把辅助蛋白基因从DNA和mRNA水平导入目的细胞DC，在DC前体及其分化、成熟的各个时相，连续、动态地分析辅助蛋白对DC特征性表面标志及免疫相关基因的表达水平、摄取和处理抗原、激发和调控免疫应答等功能的影响，以期揭示HIV/AIDS患者DC功能明显异常和失调的原因。 首先，分别将6个辅助蛋白基因克隆到pEGFP-N2和pCS2+表达载体，得到具有绿色荧光蛋白融合基因的表达载体，将分别用于DNA和mRNA水平转染DC。再以K562细胞为模型建立mRNA转染细胞的基本方法；以人外周血CD14单核细胞为前体，建立了体外“2＋2”快速诱导DC的方法。最后，利用Amaxa转染系统，从DNA水平研究辅助蛋白对DC前体（单核细胞）的功能影响。发现单核细胞转染辅助蛋白与GFP融合基因5h后，胞内蛋白大量表达，且能维持表达48h；其中Nef、Tat、Vpu、Rev、Vif、Vpr表达效率分别为35.42%、34.42%、43.42%、 17.07%、13.65%、10.29%；单核细胞转染基因后，表型CD14、HLA-DR、CD80、CD83、CD86、DC-SIGN没有明显的表达变化；转染Nef、Vpu、Rev辅助蛋白后，单核细胞有10％凋亡；Vpr能抑制单核细胞IL-10的分泌，Nef能促进分泌IL-6。 总之，通过构建辅助蛋白的表达载体，优化DC的体外培养过程以及mRNA转染方法，并成功将辅助蛋白导入DC前体，鉴定其表型和功能变化。为研究辅助蛋白影响DC的功能和机制建立了稳定而可行的实验系统。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-10-13 |
| 源URL | [http://159.226.149.42:8088/handle/152453/6081]  |
| 专题 | 昆明动物研究所_分子免疫生物学 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 陆小鹏. 树突状细胞与HIV-1 辅助蛋白相互作用的体外研究——新的实验体系的建立与应用[D]. 北京. 中国科学院研究生院. 2008. |
入库方式： OAI收割
来源：昆明动物研究所
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