重组腺病毒载体vAd2tat 的构建及其在细胞中的表达
文献类型：期刊论文
| 作者 | 王路1,2; 白雪1,2; 刘红亮1,2; 张高红1; 郑永唐[*]1 |
| 刊名 | 免疫学杂志
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| 出版日期 | 2009 |
| 卷号 | 25期号:2页码:168-172 |
| 关键词 | HIV21 tat 293 细胞 腺病毒 基因克隆 |
| 其他题名 | Construction of replication2def icient recombinant adenoviruses containing HIV21 tat gene and its expression in 293 cells |
| 通讯作者 | zhengyt@mail.kiz.ac.cn |
| 合作状况 | 其它 |
| 中文摘要 | 目的构建含HIV-1tat基因重组腺病毒,观察在不同细胞中外源蛋白Tat的表达,作为DC抗HIV疫苗的基础。方法通过PCR扩增,获得HXB2tat的cDNA片段,定向克隆入腺病毒转移载体pTrack-CMV,线性化后转化含有腺病毒骨架pAd-easy-1的大肠杆菌BJ5183,获得同源重组的质粒prAd-tat,PacⅠ酶切纯化后转染293细胞,包装成具有感染力的复制缺陷型重组腺病毒vAd-tat。结果经PCR、酶切及DNA序列测定,插入片段大小、方向正确,获得具有感染力的含有HIV-1tat基因的重组腺病毒;通过Western blot方法检测,重组腺病毒在293细胞中表达出Mr为15000的蛋白。结论成功构建了含有HIV-1tat基因的腺病毒,并观察到该基因在细胞中的表达。 |
| 英文摘要 | Objective T o construct replication 2 deficient recombinant adenoviruses containing HIV 2 1 tat gene and express Tat protein in various cells for establishing a foundation of DC vaccine. Methods HIV 2 1 tat gene fragment was obtained by PCR and cloned into shuttle vector pTrack 2 CMV , and then transformed into E . coli BJ5183 containing adenoviruses backbone pAd 2 easy 2 1 after linearization at a Pme Ⅰ site. The resulting recombinant plasmids , designated prAd 2 tat , were digested by Pac Ⅰ and then transfected into packaging cell lines 293 cells with Lipofectamin 2000 to get infective replication 2 deficient recombinant adenoviruses vAd 2 tat. Results HIV 2 1 tat gene was correctly cloned into adenoviruses vector , which was identified by digestion and sequencing; tat could be found in the supernatants by using PCR , and its ex 2 pression was detected in 293 cells and Hela cells by Western blotting. Conclusion The replication 2 deficient recombinant adenoviruses is con 2 structed and the tat protein is expressed in 293 cells and Hela cells successfully. |
| 收录类别 | 其他 |
| 资助信息 | 国家自然科学基金(30471605);云南省科技攻关计划(2004NG12);中国科学院知识创新工程重要方向(KSCX1-YW-R-15);“西部之光”人才计划资助. |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-10 |
| 源URL | [http://159.226.149.42:8088/handle/152453/6425]  |
| 专题 | 昆明动物研究所_分子免疫药理学 昆明动物研究所_动物模型与人类重大疾病机理重点实验室 |
| 作者单位 | 1.中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室分子免疫药理学实验室 2.中国科学院研究生院; |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 王路,白雪,刘红亮,等. 重组腺病毒载体vAd2tat 的构建及其在细胞中的表达[J]. 免疫学杂志,2009,25(2):168-172. |
| APA | 王路,白雪,刘红亮,张高红,&郑永唐[*].(2009).重组腺病毒载体vAd2tat 的构建及其在细胞中的表达.免疫学杂志,25(2),168-172. |
| MLA | 王路,et al."重组腺病毒载体vAd2tat 的构建及其在细胞中的表达".免疫学杂志 25.2(2009):168-172. |
入库方式： OAI收割
来源：昆明动物研究所
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