四步法消除SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR中引物二聚体的影响
文献类型：期刊论文
| 作者 | 张驰宇1,2; 张高红1,2; 杨敏1; 贲昆龙[*]1 |
| 刊名 | 中国生物化学与分子生物学报
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| 出版日期 | 2004 |
| 卷号 | 20期号:3页码:387-392 |
| 关键词 | 引物二聚体 荧光实时定量RT-PCR SYBR greenⅠ 四步法 RNA 定量 |
| 通讯作者 | kben@vip.sina.com |
| 合作状况 | 其它 |
| 中文摘要 | 为建立一种新的SYBR greenⅠ实时定量RT-PCR方法，使之能够有效消除引物二聚体(PDs)对实时定量结果的影响，对RT-PCR特异性扩增产物和PDs分别进行了凝胶电泳检测和熔解曲线分析，依据PDs和扩增产物的熔解温度(Tm)特点，在通用的三步法的延伸步骤之后，增加一个短暂的(5s)恒温和荧光检测步骤，使这个步骤的温度高于PDs的Tm，但低于扩增产物的Tm，简称该法为四步法，PDs的Tm通常高于72℃，但低于扩增产物的Tm，将四步法第四步的温度设置在高于PDs的Tm，但低于扩增产物的Tm时，四步法能够有效地消除PDs的影响，对三步法和四步法SYBR greenⅠ实时定量RT-PCR进行了比较，发现三步法根本不能用于RNA的实时定量，而四步法能够实现包括低丰度RNA在内的RNA的定量，选择Tm值尽可能小的引物，使PDs与扩增产物Tm值之间有足够的差距，将更有利于四步法的应用，并可成功地用于低丰度RNA的准确定量。 |
| 收录类别 | 其他 |
| 资助信息 | 国家自然科学基金项目 (No .3 0 170 894) |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2013-06-26 |
| 源URL | [http://159.226.149.42:8088/handle/152453/7527]  |
| 专题 | 昆明动物研究所_分子免疫药理学 |
| 作者单位 | 1.中国科学院昆明动物研究所分子与细胞免疫学实验室,昆明650223 2.中国科学院研究生院,北京100039 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 张驰宇,张高红,杨敏,等. 四步法消除SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR中引物二聚体的影响[J]. 中国生物化学与分子生物学报,2004,20(3):387-392. |
| APA | 张驰宇,张高红,杨敏,&贲昆龙[*].(2004).四步法消除SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR中引物二聚体的影响.中国生物化学与分子生物学报,20(3),387-392. |
| MLA | 张驰宇,et al."四步法消除SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR中引物二聚体的影响".中国生物化学与分子生物学报 20.3(2004):387-392. |
入库方式： OAI收割
来源：昆明动物研究所
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