小鼠GATA-3基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴别
文献类型：期刊论文
| 作者 | 李玉晓[*]1; 何晓光1; 姚永刚2; 王雨1 |
| 刊名 | 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
 |
| 出版日期 | 2017 |
| 卷号 | 31期号:8页码:627-632 |
| 关键词 | 鼻炎 变应性 RNA干扰 GATA-3 慢病毒载体 小鼠 |
| 通讯作者 | liyuxiao7210@163.com |
| 中文摘要 | 目的:探索干扰小鼠GATA-3基因的慢病毒载体的构建与鉴别方法。方法:分析小鼠单个核细胞内GATA-3基因的编码区,设计并合成3条最佳动力学参数靶点干扰序列的单链oligo。利用PCR技术对合成的单链oligo进行拼接反应,将合成好的序列装入shRNA慢病毒载体并转化至感受态细胞DH5α,测序并鉴定重组克隆中的基因序列后构建shRNA-GATA-3表达载体。根据不同的干扰序列将慢病毒载体分为4组:siRNA-685(LV3-GATA-3-Mus-685)组、siRNA-1152(LV3-GATA-3-Mus-1152)组、siRNA-1615(LV3-GATA-3-Mus-1615)组和对照组。将shRNA载体分别与表达载体共转染入293T细胞,通过qPCR检测筛选出最优干扰序列。将筛选到最佳的LV3-GATA-3-Mus-1615干扰序列构建入慢病毒载体,用构建的慢病毒干扰载体和包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度。结果:克隆测序验证无误,慢病毒载体构建成功。siRNA-1615组GATA-3mRNA相对表达量(0.004)与siRNA-685组(0.009)、siRNA-1152组(0.009)和对照组(0.022)相比明显减少,LV3-GATA-3-Mus-1615为最佳的干扰序列。收集的病毒上清测定病毒的滴度为5×10~8 TU/ml。转染实验48h后,荧光显微镜观察转染成功。结论:成功构建并鉴定小鼠GATA-3基因RNAi慢病毒载体。 |
| 收录类别 | 其他 |
| 资助信息 | 云南省自然基金资助项目(No:2011FZ120) |
| 语种 | 中文 |
| 源URL | [http://159.226.149.26:8080/handle/152453/11600]  |
| 专题 | 昆明动物研究所_动物模型与人类重大疾病机理重点实验室 昆明动物研究所_重大疾病机理的遗传学 |
| 作者单位 | 1.昆明医科大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科;昆明650032 2.中国科学院昆明动物研究所 动物模型与人类疾病机理重点实验室 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 李玉晓[*],何晓光,姚永刚,等. 小鼠GATA-3基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴别[J]. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志,2017,31(8):627-632. |
| APA | 李玉晓[*],何晓光,姚永刚,&王雨.(2017).小鼠GATA-3基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴别.临床耳鼻咽喉头颈外科杂志,31(8),627-632. |
| MLA | 李玉晓[*],et al."小鼠GATA-3基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴别".临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 31.8(2017):627-632. |
入库方式： OAI收割
来源：昆明动物研究所
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