酵母双杂交技术构建重组雌激素受体相关受体(ERR)基因酵母
文献类型：期刊论文
| 作者 | 李剑 ; 饶凯锋 ; 马梅 ; 王子健 |
| 刊名 | 环境科学学报
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| 出版日期 | 2011-01-06 |
| 期号 | 1页码:33-39 |
| 关键词 | 酵母双杂交 雌激素受体相关受体 重组基因酵母 内分泌干扰化合物 |
| 中文摘要 | 应用酵母双杂交技术构建了重组雌激素受体相关受体(ERR)基因酵母,用以筛选环境中具有ERR干扰活性的化合物.实验先提取并纯化含有ERRγ基因的酵母表达质粒pGBT9-ERRγ,称为诱饵质粒;再提取并纯化含有ERRγ协同激活因子GRIP1基因的酵母表达质粒,形成靶质粒pGAD424-GRIP1,然后将诱饵质粒和靶质粒同时转化到酵母细胞Y187中,于营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu)上筛选阳性菌落,构建ERRγ-GRIP1双杂交酵母.同时,考察了ERRγ-GRIP1酵母与典型的雌激素拮抗剂——4-羟基他莫西酚(4-OHT)的结合情况.结果表明,4-OHT能够抑制ERRγ-GRIP1酵母酶活性,并存在显著的剂量-效应关系,半数抑制浓度(RIC50)值为7.9×10-6mol•L-1.最后,进一步建立了检测环境化合物诱导/抑制ERRγ-GRIP1酵母β-半乳糖苷酶活性的实验方法,用于检测典型的内分泌干扰物.双酚A(BPA)实验结果表明,BPA不能诱导/抑制ERRγ介导的酶活性,但BPA与4-OHT共同暴露时,能够修复4-OHT的抑制活性;经体外代谢活化后,BPA的修复活性得到加强,证实了该重组基因酵母用于环境污染物内分泌干扰效应筛选的可行性. |
| 公开日期 | 2011-12-30 |
| 源URL | [http://159.226.240.226/handle/311016/2368]  |
| 专题 | 生态环境研究中心_环境水质学国家重点实验室 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 李剑,饶凯锋,马梅,等. 酵母双杂交技术构建重组雌激素受体相关受体(ERR)基因酵母[J]. 环境科学学报,2011(1):33-39. |
| APA | 李剑,饶凯锋,马梅,&王子健.(2011).酵母双杂交技术构建重组雌激素受体相关受体(ERR)基因酵母.环境科学学报(1),33-39. |
| MLA | 李剑,et al."酵母双杂交技术构建重组雌激素受体相关受体(ERR)基因酵母".环境科学学报 .1(2011):33-39. |
入库方式： OAI收割
来源：生态环境研究中心
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