凡纳滨对虾Na+/HCO3-共转运体基因的克隆及其pH调节功能的研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 蔡奕明 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 2017-07-02 |
| 导师 | 胡超群 |
| 关键词 | Na+/HCO3- 共转运体，Litopenaeus vannamei，原位杂交，pH刺激，RNA干扰，酸碱平衡 |
| 学位专业 | 生物工程 |
| 中文摘要 | 凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei），俗称南美白对虾，是我国最主要的养殖对虾。经实验证明，凡纳滨对虾对高pH环境有较强的耐受力，经过逐步驯化后能在pH 9.0以上的水体生存，具有在盐碱地养殖的潜能。凡纳滨对虾能够在较广的pH环境中成活，这与其强大的pH调节能力有着密切的关系。因此，深入研究凡纳滨对虾与pH调节相关的基因，对阐明其pH调节的分子机制和选育耐高pH品种具有重要意义。Na+/HCO3- 共转运体（NBC）是pH调节过程中的一个关键的跨膜离子转运蛋白，本文围绕凡纳滨对虾Na+/HCO3- 共转运体基因（Lv-NBC）进行了以下研究 1. 通过RACE方法，首次从凡纳滨对虾中克隆到Lv-NBC的全长cDNA序列。获得的Lv-NBC cDNA序列全长为4479 bp，其中包含59 bp的5'-非翻译区（UTR），835 bp的3'-UTR和3585 bp的开放阅读框（ORF），其编码1194 个氨基酸的蛋白质，推导的分子量为134.34kDa，预测的等电点为6.15。Lv-NBC的结构域是由两个功能结构域（Pfam：Band_3_cyto和HCO3_cotransp）和十二个跨膜（TM）结构域组成。 2. 阐述了Lv-NBC在组织中的分布情况。实时荧光定量PCR结果表明，Lv-NBC在不同组织中均有表达，其中鳃的表达量最高，其次为胃、脑、肌肉、肠和心脏，而眼柄、肝胰腺和血细胞中表达量则较低。原位杂交结果显示，Lv-NBC在虾的鳃中广泛表达，并且主要在次级鳃丝的细胞中表达。 3. 研究了凡纳滨对虾鳃Lv-NBC mRNA在低pH（6.8）和高pH（8.9）刺激下的表达模式。在刺激后1小时，pH 6.8和8.9组中Lv-NBC mRNA的相对表达水平都急剧增加至峰值（p< 0.05），然后随时间流逝逐渐下降。在刺激后12小时，所有刺激组中Lv-NBC mRNA的表达水平均降至本底水平。结果表明：Lv-NBC可能参与凡纳滨对虾体内的pH调节。 4. 利用RNA干扰（RNAi）实验，研究了在pH胁迫下Lv-NBC的沉默对凡纳滨对虾存活率的影响。结果表明，注射siRNA-1的对虾在pH胁迫后短时间内出现大量死亡（高低pH胁迫后6小时存活率均低于40%），与此同时，“DEPC水”和“NC siRNA”注射组中虾的存活率较高。结果表明：Lv-NBC在对虾适应低和高pH环境时起着重要作用。 以上研究结果表明，Lv-NBC是凡纳滨对虾体内pH调节过程中一个重要的基因，对其体内pH稳态的维持具有重要作用。 |
| 源URL | [http://ir.scsio.ac.cn/handle/344004/17432]  |
| 专题 | 南海海洋研究所_学位论文（硕士） |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 蔡奕明. 凡纳滨对虾Na+/HCO3-共转运体基因的克隆及其pH调节功能的研究[D]. 2017. |
入库方式： OAI收割
来源：南海海洋研究所
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