干牡蛎酶解制备抗氧化功能肽的研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 李茹 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 2017-07-02 |
| 导师 | 尹浩 |
| 关键词 | 干牡蛎,蛋白酶解,分离纯化,活性肽,抗氧化 |
| 学位专业 | 生物工程 |
| 中文摘要 | 牡蛎是我国的重要养殖贝类，近年来，牡蛎蛋白及其酶解物的抗氧化性已经成为研究热点，已有文献报道经蛋白酶酶解后获得的小分子肽类具有多种生物活性，如抗氧化活性、抗肿瘤活性以及血管紧张素抑转化酶（ACE）制剂活性等，在生物医药、保健品以及化妆品等领域具有广阔的开发利用前景。同时，《中国药典》中记载将干牡蛎作药，具有重镇安神、软坚散结等功效，而目前尚未见有关干牡蛎酶解产物的研究报道。鉴于原料状态是影响酶解产物的重要因素，本文对干牡蛎的酶解方法及其抗氧化酶解物开展研究，以期发现活性良好的新型肽类，为深入开发牡蛎资源提供理论依据和技术支持，为抗肿瘤、抗氧化等药物的研发提供研究基础。主要研究结果如下： 1. 对干牡蛎的主要成分进行分析，测得干牡蛎中的蛋白质含量为49.7%，脂肪含量为6.5%；利用氨基酸分析仪对干牡蛎中的16种氨基酸含量测定，分析表明干牡蛎中的氨基酸含量丰富，种类齐全，其中与风味有关的氨基酸如甘氨酸、谷氨酸以及精氨酸含量较高，表明干牡蛎是一种美味营养的食材，可以用来制备抗氧化活性肽的优质原料。 2. 对酶解干牡蛎的蛋白酶进行筛选，分别采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶以及胰蛋白酶水解干牡蛎，综合比较了各个酶解产物的分子量，水解度以及DPPH·清除能力，结果显示碱性蛋白酶效果最佳。3. 对碱性蛋白酶酶解干牡蛎的条件进行优化，首先采用单因素实验分别考察了温度、pH、料液比、酶底比以及反应时间对碱性蛋白酶酶解反应的影响，进而利用响应面法对其酶解条件进行优化，发现温度对碱性蛋白酶水解反应的影响要大于pH和酶底比，得到其二次回归方程为：Y=81.83+3.95* A+1.32* B+2.54* C+0.56 * A * B-1.36 * A * C+2.56 * B * C-7.24 * A^2-2.46* B^2-7.63* C^2，最佳酶解条件：温度为55℃，pH为10，酶底比（E/S）为4400U/g，此条件下获得的最大DPPH·清除率为（76.73±5.99）%。 4. 利用不同的抗氧化性能的测定手段（ABTS法、DPPH·清除法以及羟自由基清除法）对干牡蛎酶解物的活性进一步测定，结果证实其酶解物具有良好的活性。 5. 对干牡蛎酶解物中16种氨基酸进行测定，发现干牡蛎经酶解后，其中的苏氨酸、丝氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸和组氨酸含量均升高。 6. 凝胶电泳法和空间排阻色谱分析表明酶解产物的分子量主要分布在1KDa-14KDa，对抗氧化牡蛎酶解物的有效成分开展进一步研究，通过反复地超滤、凝胶柱色谱以及反相高效液相色谱分离纯化，获得4个新型抗氧化肽类，分子量分别为： 863.4Da、1102.6Da、1136.6Da、和857.4Da，经过质谱数据分析，鉴定其结构为：TPEAMTSK、VAPEEHPVLL、VPSQANGATHR和DANPLSGGK。 |
| 源URL | [http://ir.scsio.ac.cn/handle/344004/17446]  |
| 专题 | 南海海洋研究所_学位论文（硕士） |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 李茹. 干牡蛎酶解制备抗氧化功能肽的研究[D]. 2017. |
入库方式： OAI收割
来源：南海海洋研究所
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