本发明涉及一种三维石墨烯乳酸传感器的制备方法，步骤为：采用PECVD法以铜箔为基底生长三维石墨烯纳米墙；将三维石墨烯块漂浮在Fe(NO3)3溶液表面以刻蚀铜箔，经超纯水清洗后转移至PET基材；采用丝网印刷术在三维石墨烯/PET表面印制三电极，然后按照壳聚糖‑戊二醛交联法将乳酸氧化酶固定到三维石墨烯表面对电极进行功能化处理；最后在电化学工作站下对电极进行乳酸的灵敏性、稳定性、实时性和特异性检测，由此获得所需三维石墨烯乳酸传感器。本发明能够以经济环保、简单高效及质量可控的方式制得石墨烯乳酸传感器，且石墨烯纳米墙丰富的三维导电网络结构和巨大的比表面积等优点有效地提升了对乳酸检测的灵敏性和实时性，该传感器可用于医疗卫生健康领域。