测定生物膜好氧层厚度和厌氧层厚度的装置及测定方法，使用装废水的广口瓶和生物膜测试槽，向广口瓶中通入氧气调节废水的溶氧浓度，当广口瓶中废水的溶氧浓度达到设定数值后，将废水引入生物膜测试槽，当广口瓶和生物膜测试槽中的废水浓度达到实验数值后，在生物膜测试槽中放入生物膜，通过溶解氧微电极测定生物膜内部微观溶解氧浓度分布，计算生物膜好氧层厚度与厌氧层厚度。