基于DNAzyme探针的疾病核酸检测方法
文献类型：学位论文
| 作者 | 杨丽 |
| 答辩日期 | 2014-05 |
| 文献子类 | 博士 |
| 授予单位 | 中国科学院大学 |
| 导师 | 唐卓 |
| 关键词 | 核酸检测 Dnazyme探针 G-四聚体 定性检测 定量检测 |
| 学位专业 | 药物化学 |
| 英文摘要 | 疾病与人的生命息息相关。疾病的检测可以用于预防，诊断，监测，指导治疗疾病。因此，建立经济高效、灵敏准确的疾病检测方法具有十分重要的作用和意义。目前，最主要的疾病检测方法主要有基于生化反应，免疫学和核酸的检测技术。生化反应的方法运用于疾病检测虽简单快捷，但其灵敏度不高，分析范围有限，抗干扰性差。而基于免疫学方法的疾病检测技术，仅能作一个初步的估计指标，其灵敏度和准确性有很大的局限性。相比而言，核酸检测技术是基于基因水平的检测方法，准确性高，能为疾病检测提供最直接的证据，并且灵敏度高、特异性强，能够更早更准确的发现疾病，为患者争取到更为有利的治疗时期。现临床上最广泛使用的核酸检测方法是实时荧光定量PCR的方法，但需要依赖昂贵的荧光定量PCR仪和荧光探针，检测成本远远高于普通PCR，同时也增加了患者的诊断费用，不利于大范围推广。基于含有G-四聚体的DNAzyme探针的疾病的核酸检测方法，是一种在PCR检测平台上利用DNAzyme探针对疾病基因进行检测的方法，该方法仅需要普通PCR仪及非荧光修饰探针，简单快速、准确高效、经济实用。DNAzyme是一种能够产生信号的、具有催化功能的DNA序列。该含有G-四聚体的DNAzyme能与卟啉类等结合具有过氧化物酶活性使信号底物产生颜色、荧光等多种信号而被用作核酸检测技术的信号报告分子。本论文所涉及的是以含有G-四聚体的DNAzyme探针为基础，与疾病基因进行互补配对，在外切酶活性的作用下从而释放出DNAzyme探针中的G-四聚体序列，通过该序列发挥其活性产生多种可读的检测信号，从而报告疾病检测结果。本论文分为两个章节：第一部分工作主要是基于DNAzyme探针和DNA聚合酶的5’-3’外切酶特性建立的一种乙肝病毒检测技术，主要内容及结果如下：1. 通过对DNAzyme探针的改性，使该方法实现了PCR一步扩增检测，建立了该方法用于临床乙肝病毒检测的基础和可行性；2. 针对各种亚型乙肝病毒不同保守区段设计了三对探针，通过扩增显色筛选出最优检测探针，确立了最终DNAzyme报告探针；3. 以ABTS为底物，建立溶液由无色变为绿色的乙肝病毒定性检测体系，也可测定溶液在414nm处的光吸收值的定量检测。4. 以盐酸酪胺（Tyramine?HCl）为底物，在320nm的激发光和410nm发射光处检测荧光信号，建立乙肝病毒定量检测体系。5. 运用UNG防污染体系用于乙肝病毒临床检测，提高了该方法的可靠性和实用性。6. 最终确立了乙肝病毒临床血清样本的高效、灵敏、准确检测体系及方法。第二部分工作是基于DNAzyme探针和Lambda 外切酶特性建立肝细胞癌相关APC基因启动子区异常甲基化的检测方法及体系。主要内容及结果如下：1. 通过多种可行性实验，最终确立了包含完整G-四聚体序列CatG4及目的基因检测序列的探针结构，并建立了基于Lambda 外切酶的核酸放大检测体系；2. 实现了该方法用于单链核酸的检测，使其具有了核酸检测的基础和可行性。3． 与PCR方法相结合，建立了该方法的双链核酸检测体系及方法，具有良好的灵敏度及准确性。4. 利用该方法实现了APC基因启动子区异常甲基化的检测，并可通过可视化显色的方式对检测结果进行报告 |
| 学科主题 | 天然产物研究 |
| 语种 | 中文 |
| 产权排序 | 1 |
| 源URL | [http://210.75.237.14/handle/351003/28788]  |
| 专题 | 成都生物研究所_天然产物研究 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 杨丽. 基于DNAzyme探针的疾病核酸检测方法[D]. 中国科学院大学. 2014. |
入库方式： OAI收割
来源：成都生物研究所
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