地榆皂苷Ⅱ诱导肿瘤细胞凋亡的相关研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 王振龙 |
| 答辩日期 | 2016-05 |
| 文献子类 | 硕士 |
| 授予单位 | 中国科学院大学 |
| 导师 | 姬建新 |
| 关键词 | 地榆皂苷ⅱ 抗肿瘤活性 细胞凋亡 死亡受体 活性氧 |
| 学位专业 | 药物化学 |
| 英文摘要 | 目的：地榆皂苷Ⅱ是从中草药地榆中提取的一种三萜皂苷。目前的研究表明地榆皂苷Ⅱ对于一些肿瘤细胞有杀伤作用。本实验目的在于检测地榆皂苷Ⅱ在多种癌细胞中抗肿瘤活性的强弱，并进一步研究地榆皂苷Ⅱ诱导某些肿瘤细胞凋亡的分子机制。研究方法：不同浓度的地榆皂苷Ⅱ处理MDA-MB-231、 HepG2、MCF-7 skov3、capan-1细胞，使用SRB法检测细胞的增殖抑制率；Caspase-Glo 3/7 Assay细胞凋亡检测试剂盒检测不同地榆皂苷Ⅱ浓度下肿瘤细胞的凋亡率；Western blot检测地榆皂苷Ⅱ对细胞部分促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的表达影响；DCF H-DA探针检测地榆皂苷Ⅱ对细胞内ROS水平的影响。结果：1、在多种肿瘤细胞株上评价了地榆皂苷Ⅱ的细胞毒性，包括乳腺癌细胞株MDA-MB-231、乳腺癌细胞株MCF-7、卵巢癌细胞株SKOVE3、胰腺癌细胞株Capan-1、肝癌细胞株HepG2。我们发现地榆皂苷Ⅱ能剂量依赖地抑制这五种肿瘤细胞的体外增殖，GI50依次为7.55±0.36 mg/ml、9.37±1.57 mg/ml、12.97±0.13 mg/ml、6.2±1.2 mg/ml、15.01±2.28 mg/ml。说明地榆皂苷Ⅱ有广泛地的抗肿瘤活性；2、地榆皂苷Ⅱ处理24 h后，能够有效的诱导MDA-MB-231细胞的凋亡。在地榆皂苷Ⅱ浓度为20μg/mL时，细胞中caspase/7的活性明显上调；3、通过DCFH-DA探针检测细胞中的活性氧水平，地榆皂苷Ⅱ在5 μg/mL、10μg/mL、20 μg/mL时，细胞内的ROS导致的荧光强度明显高于阴性对照。经过计算，细胞中的ROS水平比阴性对照升高了30%以上。抗氧化剂NAC（5mM）预处理后6 h后，能够明显降低20 μg/mL地榆皂苷Ⅱ所诱导的细胞凋亡；4、在不同浓度的地榆皂苷Ⅱ处理12 h后，随着药物浓度的增加（2.5 μg/mL,5 μg/mL,10μg/mL,15 μg/mL,20 μg/mL），DR4和DR5的表达逐渐增加，地榆皂苷Ⅱ上调DR4、DR5的表达，激活死亡受体凋亡途径；5、在0到20μg/mL的浓度范围内，地榆皂苷Ⅱ可以有效的上调CHOP的表达，并且呈明显的浓度依赖性。使用NAC（5mM）预处理2 h后，地榆皂苷Ⅱ诱导的CHOP表达上调被有效的降低；6、地榆皂苷Ⅱ诱导了细胞中的p-JNK和p-P38含量上升,磷酸化激活p53。磷酸化的p53能够下调抗凋亡基因Bcl-2的表达，上调促凋亡基因Bax的表达，激活线粒体凋亡通路。结论：地榆皂苷Ⅱ通过诱导肿瘤细胞凋亡来抑制肿瘤细胞增殖，对于多种肿瘤细胞具有体外增殖抑制效果。具体机制为：地榆皂苷Ⅱ通过诱导活性氧，激活内质网应激途径以及线粒体途径。另外，地榆皂苷Ⅱ能够上调死亡受体的表达，激活死亡受体途径。在三条凋亡通路共同作用下，地榆皂苷Ⅱ通过诱导肿瘤细胞凋亡，抑制了肿瘤细胞体外增殖。我们的研究证实了地榆皂苷Ⅱ抗肿瘤活性的普适性，对三大凋亡通路进行了细致的研究，发现地榆皂苷Ⅱ能够通过上调DR4、DR5的表达激活Trail外源凋亡通路，对地榆皂苷Ⅱ抗肿瘤机制有了新的认识，为地榆皂苷Ⅱ作为抗肿瘤药物的进一步开发打下了理论基础。 |
| 学科主题 | 天然产物研究 |
| 语种 | 中文 |
| 产权排序 | 1 |
| 源URL | [http://210.75.237.14/handle/351003/28840]  |
| 专题 | 成都生物研究所_天然产物研究 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 王振龙. 地榆皂苷Ⅱ诱导肿瘤细胞凋亡的相关研究[D]. 中国科学院大学. 2016. |
入库方式： OAI收割
来源：成都生物研究所
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