人源及鼠源sPLA2-IIE蛋白以及人转录因子BRN2蛋白的结构生物学研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 张玉洁 |
| 答辩日期 | 2011-05-25 |
| 文献子类 | 硕士 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 授予地点 | 广州生物院 |
| 导师 | 刘劲松 |
| 关键词 | 磷脂酶 A2 group IIE 包涵体 复性 磷脂水解 |
| 学位名称 | 硕士 |
| 学位专业 | 生物化学与分子生物学 |
| 其他题名 | Structural Studies on Human and Mouse sPLA2-IIE Protein and Human Transcription Factor BRN2 |
| 英文摘要 | I） 分泌型磷脂酶A2作为一个成员众多的蛋白家族，参与了包括免疫应答，炎症反应，细胞的增殖、存活、迁移在内的多种生理病理过程。Group IIE (sPLA2-IIE)是该家族最新发现的成员之一。先前的研究发现，与该家族其它成员的广谱表达不同，sPLA2-IIE仅仅在大脑，心脏，肺部和胰腺等有限的几个组织中表达。另外还有研究表明，sPLA2-IIE在炎症反应中发挥着重要作用。抗菌实验表明，sPLA2-IIE对革兰氏阴性菌的生长存在抑制作用。然而，由于可获得的活性sPLA2-IIE蛋白产量很低，更深入的研究受到了较大的阻碍。本课题利用大肠杆菌表达系统成功的实现了人源和鼠源sPLA2-IIE蛋白的大量表达，并且通过包涵体变复性的方式实现了蛋白的纯化，获得高纯度的目的蛋白。经过一系列的酶活性质测试和圆二色谱分析，证明通过复性获得的目的蛋白具有与天然状态下获得的可溶蛋白可比的各种性质。这部分工作将会为后来对于sPLA2-IIE蛋白的功能学和结构学研究提供获得活性蛋白的平台。 摘要（II） POU家族由一系列具有POU结构域的转录因子组成。POU结构域含有两个保守的亚结构域POUS和POUH，它们中间由一段保守性较差的linker区域连接。由于linker区域的可塑性，导致相同的POU蛋白可以通过不同的四级结构与不同的DNA靶位点发生特异性结合，对下游靶点的转录进行调控。BRN2蛋白作为POU家族的成员，在中枢神经系统分化过程中起着重要作用。同时，该蛋白在黑素瘤细胞中的异常表达也受到了广泛关注。目前针对POU蛋白与DNA靶序列的结合共提出了三种序列依赖性模型，分别是PORE，MORE和NORE模型。其中NORE模型是针对BRN2蛋白分子模拟实现的，目前并没有获得晶体学数据的支持。本课题通过大肠杆菌表达系统成功的实现了BRN2蛋白DNA结合域和转录激活域-DNA结合域的可溶表达，通过亲和层析，离子交换层析和分子筛层析等方法，获得了高纯度的目的蛋白。另外，依据文献合成了3条BRN蛋白的DNA靶序列，进行了单独蛋白与蛋白-DNA复合物的晶体筛选。目前获得了疑似晶体，有待进一步验证。 |
| 学科主题 | 生物化学与分子生物学 |
| 语种 | 中文 |
| 页码 | 77 |
| 源URL | [http://ir.foo.ac.cn/handle/2SETSVCV/978]  |
| 专题 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 作者单位 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 张玉洁. 人源及鼠源sPLA2-IIE蛋白以及人转录因子BRN2蛋白的结构生物学研究[D]. 广州生物院. 中国科学院研究生院. 2011. |
入库方式： OAI收割
来源：广州生物医药与健康研究院
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