Tctex5 基因在四种小鼠睾丸细胞系中的表达及其与PP1γ的关系
文献类型：学位论文
| 作者 | 汤江静 |
| 答辩日期 | 2011-05-18 |
| 文献子类 | 硕士 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 授予地点 | 广州生物院 |
| 导师 | 赖良学 ; 韩毅冰 |
| 关键词 | Tctex5 基因 精子发生 PP1γ基因 |
| 学位名称 | 硕士 |
| 学位专业 | 生物化学与分子生物学 |
| 其他题名 | Tctex5 gene expression pattern in four kinds of mouse testicular cells and it's relationship to PP1γ |
| 英文摘要 | 研究表明雄性不育与生精过程中基因异常有关，因此，研究生精过程中相关基因的功能与调控机制对解决不育问题具有重要意义。Tctex5（T-complex testis expressed 5）是近年来在小鼠中发现的一个可能与雄性生殖有关的基因，是蛋白磷酸酶1（PP1）的潜在抑制子。Tctex5可与PP1的一个亚型PP1γ形成复合体，在此复合体中PP1γ具有提高Tctex5蛋白稳定性的作用。由于体内研究Tctex5基因操作困难，无法研究Tctex5基因在生精过程中的功能，本实验选择三种生殖细胞系：A型精原细胞系c18-4、B型精原细胞系CRL-2053、精母细胞系CRL-2196和一个支持细胞系CRL-1715，分别代表精子发生过程中出现的三种生精细胞以及睾丸中的体细胞。通过Western blot、Real-time PCR、细胞免疫荧光及RNA干扰等技术，首先研究了Tctex5与PP1γ基因在这些细胞系中的表达与分布，实验发现Tctex5与PP1γ基因主要分布于细胞核中，Tctex5在c18-4、CRL-2053和CRL-2196中的表达量依次增加，在CRL-1715中的表达量最高。而PP1γ在CRL-2053细胞中的表达量最高，在CRL-2196细胞中最低。为进一步研究小鼠睾丸中Tctex5与PP1γ的关系，我们设计了一对针对Tctex5 第一外显子的shRNA序列，分别插入到shRNA表达载体pRNAT-CMV3.1/neo质粒中，将该质粒导入高水平表达Tctex5基因的CRL-1715细胞中，经G418稳定筛选，我们获得了能稳定下调Tctex5基因表达的克隆，结果显示PP1γ基因的表达水平以及细胞定位并没有随着Tctex5的下降而发生改变，推测在CRL-1715细胞中PP1γ并不是Tctex5下游靶蛋白。这些Tctex5基因在精子发生过程中的作用以及最终为雄性不育的诊断与治疗提供一些基本信息。 研究表明雄性不育与生精过程中基因异常有关，因此，研究生精过程中相关基因的功能与调控机制对解决不育问题具有重要意义。Tctex5（T-complex testis expressed 5）是近年来在小鼠中发现的一个可能与雄性生殖有关的基因，是蛋白磷酸酶1（PP1）的潜在抑制子。Tctex5可与PP1的一个亚型PP1γ形成复合体，在此复合体中PP1γ具有提高Tctex5蛋白稳定性的作用。由于体内研究Tctex5基因操作困难，无法研究Tctex5基因在生精过程中的功能，本实验选择三种生殖细胞系：A型精原细胞系c18-4、B型精原细胞系CRL-2053、精母细胞系CRL-2196和一个支持细胞系CRL-1715，分别代表精子发生过程中出现的三种生精细胞以及睾丸中的体细胞。通过Western blot、Real-time PCR、细胞免疫荧光及RNA干扰等技术，首先研究了Tctex5与PP1γ基因在这些细胞系中的表达与分布，实验发现Tctex5与PP1γ基因主要分布于细胞核中，Tctex5在c18-4、CRL-2053和CRL-2196中的表达量依次增加，在CRL-1715中的表达量最高。而PP1γ在CRL-2053细胞中的表达量最高，在CRL-2196细胞中最低。为进一步研究小鼠睾丸中Tctex5与PP1γ的关系，我们设计了一对针对Tctex5 第一外显子的shRNA序列，分别插入到shRNA表达载体pRNAT-CMV3.1/neo质粒中，将该质粒导入高水平表达Tctex5基因的CRL-1715细胞中，经G418稳定筛选，我们获得了能稳定下调Tctex5基因表达的克隆，结果显示PP1γ基因的表达水平以及细胞定位并没有随着Tctex5的下降而发生改变，推测在CRL-1715细胞中PP1γ并不是Tctex5下游靶蛋白。这些结果为进一步研究Tctex5基因在精子发生过程中的作用以及最终为雄性不育的诊断与治疗提供一些基本信息。 |
| 学科主题 | 生物化学与分子生物学 |
| 语种 | 中文 |
| 页码 | 50 |
| 源URL | [http://ir.foo.ac.cn/handle/2SETSVCV/993]  |
| 专题 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 作者单位 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 汤江静. Tctex5 基因在四种小鼠睾丸细胞系中的表达及其与PP1γ的关系[D]. 广州生物院. 中国科学院研究生院. 2011. |
入库方式： OAI收割
来源：广州生物医药与健康研究院
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