基于噬菌体展示技术的抗CD3单链抗体12F6稳定性优化研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 刘强 |
| 答辩日期 | 2015-06-01 |
| 文献子类 | 硕士 |
| 授予单位 | 中国科学院大学 |
| 授予地点 | 广州生物院 |
| 导师 | 李懿 |
| 关键词 | 单链抗体 稳定性 同源建模 噬菌体展示 |
| 学位名称 | 工程硕士 |
| 学位专业 | 生物工程 |
| 其他题名 | Stability optimization of anti-CD3 single-chain antibody fragment 12F6 by phage display |
| 英文摘要 | 抗体作为一种极其重要的生物大分子，在科学研究、诊断以及临床治疗方面有着广泛的应用。近年来，伴随着生物技术、现代医学以及信息技术的发展，越来越多的抗体正在被改造，以便用于治疗如自身免疫性疾病、器官移植排斥以及肿瘤等恶性疾病。但是，许多有着良好生理活性的候选抗体由于稳定性不好或者表达量偏低等原因而被淘汰，这极大地限制了抗体药物的发展。研究表明，负责抗原抗体反应的抗体可变区是影响抗体稳定性的关键。这一点在单链抗体（scFv）上表现尤为明显：由于其缺少恒定区的辅助作用，虽然降低了产生免疫原性的可能，但其稳定性也较全抗体大大减弱。因此如何提高单链抗体的稳定性是一个亟待解决的问题。 在本课题中，我们选择了单链抗体的非CDR区域进行稳定性优化的研究，以最大程度避免稳定性的优化对亲和力造成的影响。我们以抗CD3单链抗体分子12F6作为稳定性优化的模板，利用蛋白质结构数据库，通过同源建模的方法，得到了12F6较为准确的三维结构。对结构分析后，我们分别找出疏水核心以及亲水表层潜在的优化位点并构建4个（108-109）突变体文库，以高通量的噬菌体展示技术为支撑，利用定向分子进化的方法对其进行系统的优化。经过共计12轮的淘选，我们得到了具备高稳定性并且易复性的抗体分子sub11及L4-7。与野生型相比，二者Tm分别提高了12℃和16℃，复性效率也分别提高1.7倍和1.3倍。为了验证该策略能否应用于其他类似抗体的稳定性优化，我们进行了一系列的验证实验，包括稳定性位点的可移植性，以及优化后抗体的生理活性等。结果表明，稳定性优化位点移植到高亲和的12F6突变体C9、C12和C88后，不但提高了它们的稳定性，同时也基本保留了它们原有的亲和力。细胞实验进一步表明，将稳定性优化的不同亲和力的12F6与特异识别NY-ESO-1抗原表位的1G4 TCR融合成ImmTAC后，不但改善了ImmTAC复性状况，同时也保留了其原有的生理活性。 该课题的研究方法及成果将为最终设计出适用于大多抗体的稳定性骨架提供重要依据，也为进一步研究抗体亲和力与生理效应关系奠定重要基础。 |
| 学科主题 | 生物工程 |
| 语种 | 中文 |
| 页码 | 81 |
| 源URL | [http://ir.foo.ac.cn/handle/2SETSVCV/1107]  |
| 专题 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 作者单位 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 刘强. 基于噬菌体展示技术的抗CD3单链抗体12F6稳定性优化研究[D]. 广州生物院. 中国科学院大学. 2015. |
入库方式： OAI收割
来源：广州生物医药与健康研究院
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