猪高效组成型启动子的筛选
文献类型：学位论文
| 作者 | 侯凯丽 |
| 答辩日期 | 2016-06-01 |
| 文献子类 | 硕士 |
| 授予单位 | 中国科学院大学 |
| 授予地点 | 广州生物院 |
| 导师 | 段子渊 ; 赖良学 |
| 关键词 | 组成型启动子 杂合启动子 猪 hCMV(E/P) hCMVE |
| 学位名称 | 工程硕士 |
| 学位专业 | 生物工程 |
| 其他题名 | The screening of the high-efficiency porcine constitutive promoters |
| 英文摘要 | 由于猪是一种重要的经济动物，同时在生理，解剖，组织及代谢等方面与人类相近，转基因猪一直是基因工程领域的一大研究热点。不管是节粮、高瘦肉率等性状的高品质猪种的开发培育还是疾病模型猪的制备，均需使用合适的启动子驱动目的基因在转基因猪体内的持续性高表达。目前，基因工程领域常用的启动子有人巨细胞病毒启动子（hCMV(E/P)），CAG启动子，人EEF1α启动子等，但这些启动子都不是猪来源的启动子，在整合进猪的基因组中可能会因被甲基化而导致目的基因无法稳定表达和遗传。同时，考虑到转基因安全问题，本实验希望能够筛选出高效的猪组成型基因启动子，并制备高效启动元件，为猪的转基因制备提供更稳定、更安全的启动子，也为注释猪的基因、研究猪特定基因的表达调节奠定基础。方法：本实验结合Touch-down PCR和突变手段对9个猪组成型基因（EEF2、PSAP、、TUBB、TMSB4、TMSB10、RPL3、FTH1、UBB和RPL6）的启动子区段进行克隆，并将人巨细胞病毒增强子（hCMVE）插入克隆的启动子区段上游构建相应的杂合启动子，以β-gal为参照，瞬转293T细胞，比较他们与hCMV(E/P)在293T细胞中启动活性的差异，筛选出高效的组成型启动子。同时，运用Promoter 2.0、Promoter Scan、NNPP、TSSW及FirstEF对9个猪组成型基因的启动子区进行预测和分析。结果：成功从猪基因组中筛选出9种表达活性较高的组成型基因的启动子区段，其中， TMSB4基因核心启动子的活性较高；并将这9种启动子与人巨细胞病毒增强子串联，其中杂合启动子hCMVE-TMSB10在293T细胞中的活性约为人巨细胞病毒启动子（hCMV(E/P)）的1.49倍；研究了5个启动子预测软件在猪组成型启动子预测方面的表现，其中FirstEF的预测结果与实验结果一致。结论：成功从猪基因组中筛选出9种表达活性较高的组成型基因的启动子区段；成功构建了9个含有hCMVE序列的杂合启动子，其中杂合启动子hCMVE-TMSB10在293T细胞中的活性约为人巨细胞病毒启动子（hCMV(E/P)）的1.49倍。 |
| 学科主题 | 生物工程 |
| 语种 | 中文 |
| 页码 | 84 |
| 源URL | [http://ir.foo.ac.cn/handle/2SETSVCV/1121]  |
| 专题 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 作者单位 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 侯凯丽. 猪高效组成型启动子的筛选[D]. 广州生物院. 中国科学院大学. 2016. |
入库方式： OAI收割
来源：广州生物医药与健康研究院
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