草鱼免疫球蛋白重链基因的克隆
文献类型：学位论文
| 作者 | 王欣欣 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 2006-07-05 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 水生生物研究所 |
| 导师 | 聂品 |
| 关键词 | 草鱼 免疫球蛋白 重链 IgM IgZ 嵌合体Ig 基因克隆 荧光定量 免疫印迹 |
| 其他题名 | Cloning of Immunoglobulin Heavy Chain Genes for the Grass Carp, Ctenopharyngoden idellus |
| 中文摘要 | 草鱼是我国重要的水产养殖鱼类，对其免疫系统的研究在理论和应用方面都具有重要意义。本研究克隆了草鱼Ctenopharyngodon idellus免疫球蛋白IgM、IgZ和一种特殊的Ig嵌合体重链基因，并研究了它们在组织器官的表达。 采用RACE-PCR的方法扩增到草鱼IgM重链的cDNA全长，其开放阅读框包含1731核苷酸，编码576个氨基酸，编码区由前导链、可变区和恒定区组成。可变区又分为4个骨架区和3个高变区。在与其它鱼类可变区的氨基酸序列比对中，发现4个骨架区的序列相对保守。骨架区（framework region, FR）2和FR3存在GKGLEW和YYCAR的保守序列，FR4存在FDYWGKGT-VTV-S的保守序列。与其它鱼类IgM恒定区氨基酸序列比较的结果显示，4个外显子的半胱氨酸和色氨酸残基都比较保守。荧光定量PCR检测显示，草鱼IgM主要在头肾、中肾和脾脏这三个免疫器官中表达，肝脏、鳃、胸腺和肠中也有少量表达，而在心脏和脑中几乎没有表达。 采用RACE-PCR和简并引物扩增的方法克隆到草鱼IgZ和一种Ig嵌合体的cDNA部分序列，分别编码487个和402个氨基酸。草鱼的IgZ与斑马鱼Danio rerio和鲤Cyprinus carpio的IgZ同源越细撸徊萦?Ig嵌合体，其恒定区CH1和CH2与IgM的相应区域一样，CH3和CH4与IgZ的相应区域一致，即μ1 + μ2 + ζ3 + ζ4的结构。根据IgZ的开放阅读框设计含有酶切位点的表达引物，构建重组表达质粒，将重组质粒转入大肠杆菌Escherichia coli M15中，经IPTG诱导获得了31 kD的融合蛋白。用切胶回收的方法对表达的蛋白进行了纯化，制备了兔抗IgZ的抗血清。经免疫印迹分析，IgZ主要在胸腺、头肾、鳃和心脏中表达，在脾脏和中肾中也有少量表达，在脑和肝脏中几乎没有表达。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 46 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12058]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 王欣欣. 草鱼免疫球蛋白重链基因的克隆[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 2006. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
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