草鱼MHC相关多肽与肿瘤坏死因子受体相关因子的克隆及其表达分析
文献类型：学位论文
| 作者 | 徐在言 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2007-07-11 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 水生生物研究所 |
| 导师 | 聂品 |
| 关键词 | 草鱼 gcSIMP gcTRAF1 gcTRAF2 基因克隆 荧光定量 免疫印迹 |
| 其他题名 | Cloning and expression analysis of SIMP and TRAFs in the grass carp |
| 中文摘要 | 草鱼（Ctenopharyngodon idellus）是我国重要的淡水养殖鱼类。在草鱼养殖中，疾病是限制其养殖生产的一个重要因子，免疫防治是控制疾病的重要而有效的途径。本文对草鱼三个免疫因子进行了克隆鉴定以及表达分析，这三个基因涉及到糖基化修饰、肿瘤免疫以及细胞凋亡三个方面。 通过RACE技术获得草鱼SIMP以及两个凋亡相关基因的cDNA全长，并采用PCR和Genome Walking的方法克隆了SIMP启动子区域，对SIMP进行了基因组结构分析。 草鱼免疫优势MHC相关多肽（gcSIMP） cDNA序列全长为4384 bp。其中5′、3′ 非编码区分别为1117 bp、849 bp，开放阅读框包含2418 bp，编码805个氨基酸。获得的gcSIMP基因组全长约为24212bp，整个基因组结构跨越16个外显子和15个内含子。启动子区域缺乏典型的TATA或CAAT结构，但存在GCN4, YY1, Sp1, Palpha, TBP, Hb，C / EBPalp，C / EBPbeta，Oct-1和AP-1等潜在的转录因子结合位点。 草鱼肿瘤坏死因子受体相关因子1（gcTRAF1）基因的cDNA序列全长为2235 bp。其中5′、3′ 非编码区分别为250 bp、326 bp，开放阅读框包含1659 bp，编码552个氨基酸。 草鱼肿瘤坏死因子受体相关因子2（gcTRAF2）全长为3162 bp。其中5′、3′ 非编码区分别为60 bp、1491 bp，开放阅读框包含1611 bp，编码536个氨基酸。 对三个基因转录和表达产物的器官组织分布进行了详细的分析。Real time PCR表明这三个基因在草鱼组织中呈组成型表达，且三者具有不同的组织分布模式。分别构建gcSIMP、gcTRAF1和gcTRAF2基因的原核表达质粒，通过原核表达、表达蛋白纯化、并制备多克隆抗体，对脑、鳃、心脏、头肾、中肾、肝脏、肌肉、脾脏、和胸腺等器官中的目的基因蛋白进行免疫印迹分析。Western blotting 结果显示gcTRAF1和gcTRAF2蛋白在各个组织中广泛表达。两种分析方法均显示了在心脏中目的基因gcTRAF1和gcTRAF2的表达量最高，在中肾中的表达量最低。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 115 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12108]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 徐在言. 草鱼MHC相关多肽与肿瘤坏死因子受体相关因子的克隆及其表达分析[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 2007. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
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