石斑鱼垂体EST分析及GTH的克隆和表达特征研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 李创举 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2007-06-16 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 水生生物研究所 |
| 导师 | 桂建芳 |
| 关键词 | 石斑鱼 垂体 性反转 激素 GTHα FSHβ LHβ FSHR LHR |
| 其他题名 | EST analysis of the pituitary of the grouper and Cloning, identification and Characterization of GTH Genes in Groupers |
| 中文摘要 | 石斑鱼是重要的海产经济鱼类，在其个体发育过程中存在先雌后雄的天然性反转现象。人工养殖的环境下石斑鱼很少发生自发的性反转，因此，由于野生雄鱼不易获得，大规模人工养殖难以推广。垂体是调节生长和生殖等生理过程的重要内分泌器官。在本研究中，我们构建了分别处于卵巢发育起始和性反转后期斜带石斑鱼垂体SMART cDNA的质粒文库，并通过测序分别筛选到232个和258个EST。将所得EST与GenBank数据库中的序列进行比对，处于卵巢发育起始和性反转后期的斜带石斑鱼垂体EST中，激素所占比例均为最高，分别为40.5％和34.9%。进一步比较分析了这两个性腺发育时期斜带石斑鱼垂体EST中各种激素相对表达丰度。与处于卵巢发育起始时期相比，处于性反转后期的斜带石斑鱼垂体中的生长/催乳激素家族（GH、PRL和SL）、促甲状腺激素β亚基（TSHβ）和阿黑皮素原（POMC）表达水平下降；促性腺激素α亚基（GTHα）表达水平急剧上升，促滤泡激素β亚基（FSHβ）、促黄体激素β亚基（LHβ）表达水平上升。 从垂体SMART cDNA质粒文库中筛选到的EcGTHα、EcFSHβ和EcLHβ基因的全长cDNA分别为647、574和594bp，分别编码94、99和115个氨基酸残基的成熟多肽。EcGTHα、EcFSHβ和EcLHβ与其它鱼类GTH亚基有很高的同源性。RT-PCR和Western blot分析表明EcGTHα、EcFSHβ和EcLHβ仅在垂体中表达；EcGTHα和EcFSHβ在三个不同性腺发育时期斜带石斑鱼垂体中的表达基本相似，但EcLHβ显示出明显的表达差异。EcLHβ在卵巢发育起始期维持高水平表达，卵巢成熟期表达下降，最后在性反转后期表达量急剧上升。将这三种亚基分别进行体外表达并制备了多克隆抗体。Western blot结果显示，处于休眠期卵巢发育时期赤点石斑鱼的垂体蛋白中，EaGTHα亚基几乎检测不到，EaFSHβ和EaLHβ亚基的表达量极低；而处于发育中卵巢时期赤点石斑鱼的垂体中GTH三个亚基的表达均上升到较高的水平。赤点石斑鱼垂体切片免疫荧光定位研究和血清ELISA同样得出了与Western blot分析相似的结论。以上多种技术研究了GTH三个亚基在石斑鱼不同性腺发育阶段的时空表达图谱，揭示出石斑鱼GTHα、FSHβ和LHβ不同于其它鱼类的表达特征。免疫荧光定位研究显示GTHα定位于石斑鱼垂体PPD区域、PI区域外围和RPD区域；FSHβ定位于PPD区域；LHβ定位于PPD区域和PI区域外围。双色荧光标记和激光共聚焦显微镜观察，清晰地将石斑鱼FSHβ和LHβ定位于垂体同一区域的不同细胞群中，为解决FSHβ和LHβ是否由同一细胞分泌这个长期争论的问题提供了确凿的细胞学证据。 鱼类存在两种GTH受体（GTHR），FSHR和LHR。本研究采用RACE-PCR方法，从赤点石斑鱼性腺中克隆了EaFSHR的全长cDNA和EaLHR的部分cDNA。EaFSHR cDNA的多聚腺苷酸尾前的序列长2393bp，编码701个氨基酸。EaFSHR多肽由信号肽（21aa）、胞外区（355aa）、跨膜区（264aa）和胞内区（61aa）构成。EaLHR仅获得跨膜区部分的cDNA。EaFSHR与其它鱼类有很高的同源性。RT-PCR结果表明EaFSHR为性腺特异表达，而EaLHR除了性腺中的表达外，在肝和脾中也有表达。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 107 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12154]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 李创举. 石斑鱼垂体EST分析及GTH的克隆和表达特征研究[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 2007. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
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