应用噬菌体展示技术对对虾白斑综合症病毒（WSSV）结构蛋白及感染相关蛋白的研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 肖囡 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2007-06-08 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 水生生物研究所 |
| 导师 | 戴和平 |
| 关键词 | 对虾白斑综合症病毒（WSSV） 噬菌体展示 单链抗体（scFv) 淘选 对虾感染相关蛋白 WSSV基因组文库 WSSV cDNA文库 |
| 其他题名 | Studies on the structural proteins of White Spot Syndrome Virus (WSSV) and shrimp functional proteins involved in the infection utilizing Phage Display Technology |
| 中文摘要 | 对虾白斑综合症病毒（White Spot Syndrome Virus, WSSV）自1992年引起对虾白斑病爆发以来，给全球对虾养殖业带来了毁灭性的打击。该病毒传播快，致死率高，已经给对虾养殖经济造成巨大损失。WSSV在分类学上已经被鉴定为一个新的病毒家族中的新种，同已知的病毒之间无明显同源性，因此对其感染宿主的分子机理的研究难以借鉴已知病毒的研究结果。同时由于对虾细胞系尚未成功建立，为该病毒结构、功能蛋白以及感染机制的研究造成很大困难。为此，本研究利用噬菌体展示技术的独特优点，对WSSV结构蛋白以及与感染相关对虾功能蛋白进行了研究。 本实验室在过去的研究中构建了抗WSSV的噬菌体展示单链抗体cDNA库，并从中筛选到了一系列能和WSSV结合的单链抗体，为了能够深入的了解WSSV表面抗原结构及其结构蛋白，揭示其致病机理，本研究分别构建了T7展示WSSV cDNA文库和M13展示WSSV基因组文库，并利用单链抗体分别对这两个文库进行“反向淘选”，筛选出单链抗体所对应的病毒抗原。由于构建T7展示WSSV cDNA文库的cDNA来源于感染了WSSV的南美白对虾，该文库中大部分cDNA为对虾的cDNA，所以此文库也可以看作是感染了WSSV的南美白对虾T7展示对虾cDNA文库 本研究首先利用纯化的抗WSSV单链抗体A1对T7展示WSSV cDNA文库进行淘选， 筛选到了能和单链抗体A1特异结合的病毒抗原WSSV388，免疫胶体金电镜观察显示WSSV388为WSSV核衣壳蛋白。 本研究对另一种特异性识别WSSV的单链抗体P1A6的基本性质进行了分析，并利用该单链抗体对M13展示WSSV基因组文库进行淘选。经过两轮筛选后，得到一个能够特异和单链抗体P1A6结合的M13噬菌体, 编号为B11。测序结果表明展示在噬菌体B11上的蛋白氨基酸序列与WSSV一开放阅读框WSSV217（WSSV-TW, AF440570）上的一段完全同源。 本研究还利用完整的WSSV病毒粒子对感染了WSSV的南美白对虾T7噬菌体展示对虾cDNA文库进行淘选，从而获得与病毒感染相关的对虾功能蛋白。经过四轮淘选得到了一个能够与WSSV病毒粒子特异结合的T7噬菌体，编号为SP4G7。由于SP4G7噬菌体与WSSV病毒粒子的结合能被对虾血细胞所影响，因此推测展示于T7噬菌体SP4G7上的外源蛋白可能代表了对虾血细胞的一个功能蛋白，并且参与了宿主细胞和WSSV病毒的相互作用。本实验为研究对虾宿主细胞与WSSV病毒相互作用提供了一种全新的试验方法。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 149 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12268]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 肖囡. 应用噬菌体展示技术对对虾白斑综合症病毒（WSSV）结构蛋白及感染相关蛋白的研究[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 2007. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
浏览0
下载0
收藏0
其他版本
除非特别说明，本系统中所有内容都受版权保护，并保留所有权利。