中华鲟垂体EST分析以及促性腺激素和生长激素的克隆和表达特征研究
文献类型：学位论文
| ; | |
| 作者 | 曹宏 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2008-06-17 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 水生生物研究所 |
| 导师 | 桂建芳 |
| 关键词 | 中华鲟 垂体 EST AsGH AsGTH-α I AsGTH-α II AsFSHβ AsLHβ |
| 其他题名 | EST analysis of Chinese sturgeon pituitary and the studies on cloning and expression characterization of GTH and GH genes |
| 中文摘要 | 中华鲟 (Acipenser sinensis Gray) 是我国的一级保护动物，隶属于硬骨鱼纲，软骨硬鳞下纲。目前，有关其生长，繁殖和性别分化的分子机制还知之甚少。因此，我们构建了中华鲟垂体SMART cDNA的质粒文库，选取的分别是人工养殖的4-龄雄性中华鲟和野外捕获的刚产完卵的24-龄雌性中华鲟。通过测序分别筛选到944个和2025个EST。将所得EST与GenBank数据库中的序列进行比对，发现在4-龄雄性中华鲟垂体库中，阿黑皮素原基因 (POMC) 表达量最高，占总表达量的10.17%。而且在该文库中，我们还重点研究了7个未能在公共数据库中找到同源序列信息的新基因，结果发现，其中的EG009337和EG009340，只在垂体和卵巢中特异性表达；而EG009334和EG009338，只在垂体中特异性表 达。这些基因有可能是与生殖和性腺分化有关的基因，值得进一步的研究。 在24龄雌性中华鲟垂体的SMART cDNA质粒文库中，我们总共得到了2025个EST克隆，881个基因，包括407个未能在公共数据库中找到同源序列信息的新基因，其中有75个含有开放阅读框，这些基因有可能是一些从未被人报道过的新基因或中华鲟特有的基因。我们还发现了8种生殖与内分泌调控相关基因。其中，促性腺激素I型和II型的α亚基 (AsGTH-α I, AsGTH-α II) 与阿黑皮素原I型和II型 (AsPOMC-I, AsPOMC-II) 是整个EST库中表达量最高的两组基因，分别占总表达量的16.64%和7.26%。通过氨基酸序列比对我们发现，和AsGTH-α I 相比较，AsGTH-α II与进化上更加原始的鱼类GTH-α同源性更高，可能是更为原始的一种AsGTH-α基因。我们还发现了促性腺激素释放激素受体基因，这也是该基因第1次在鲟形目鱼类中的报道。 从垂体SMART cDNA质粒文库中筛选到的AsGH基因的全长cDNA序列，全长为954bp，编码214个氨基酸残基的成熟多肽。AsGH与其它鱼类GH基因有很高的同源性。RT-PCR和Western blot分析表明，在中华鲟胚胎发育的14个特定时期，GH一直处于高效表达。 从垂体SMART cDNA质粒文库中筛选到的AsGTH-α I， AsGTH-α II，AsFSHβ和AsLHβ基因的全长cDNA分别为659、642、1101和584bp，分别编码115、128、99和137个氨基酸残基的成熟多肽。和其它鱼类相比，在这些基因中, GTH-α基因的保守性最强,LHβ基因的保守性次之,而FSHβ基因的保守性最弱。Western blot分析发现，GTH的3个亚基均为垂体特异表达，并且在刚产完卵的野生雌性性成熟 (17-龄) 中华鲟垂体中，GTH 的3个亚基的表达量均很高。而在人工养殖的1-，2-，3-，4-龄中华鲟垂体中，无法检测到GTH-α和LHβ蛋白，另外FSHβ蛋白也只能在4-龄中华鲟垂体中检测到而在其它年龄段的中华鲟垂体中无法检测到。中华鲟垂体切片免疫荧光定位研究发现，在刚产完卵的野生雌性性成熟 (24-龄) 中华鲟垂体中，GTH-α的表达集中在腺垂体的PPD，RPD和PI等部位，FSHβ的表达集中在腺垂体PPD的中间一小部分区域，LHβ的表达范围主要集中在腺垂体PPD，PI和靠近RPD的外围部分。在4-龄中华鲟垂体中，FSHβ主要在腺垂体RPD和PPD的外围部分表达，与24-龄中华鲟相比，FSHβ在4-龄中华鲟垂体中的分布范围要更广泛一些。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 131 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12274]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 曹宏. 中华鲟垂体EST分析以及促性腺激素和生长激素的克隆和表达特征研究, EST analysis of Chinese sturgeon pituitary and the studies on cloning and expression characterization of GTH and GH genes[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 2008. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
浏览0
下载0
收藏0
其他版本
除非特别说明，本系统中所有内容都受版权保护，并保留所有权利。