液相色谱-质谱联用测定生物样品中肝毒性微囊藻毒素及其代谢物
文献类型：学位论文
| 作者 | 戴明 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2008-06-16 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 水生生物研究所 |
| 导师 | 谢平 |
| 关键词 | 液相色谱-质谱联用 微囊藻毒素 代谢物 定量测定 方法验证 提取制备 鱼 大鼠 |
| 其他题名 | Determination of hepatotoxic microcystin and its metabolites in biological samples by liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry |
| 学位专业 | 水生生物学 |
| 中文摘要 | 随着人类社会生产力的大幅提高及人口压力的不断增大，全球范围的淡水水体富营养化现象也日趋严重，由此引起的蓝藻水华在世界范围内频繁暴发,并释放出大量有害次生代谢产物。微囊藻毒素是一种在蓝藻水华污染中出现频率最高、产毒量最大、危害最严重的一类藻毒素。微囊藻毒素进入人体可以通过很多途径，包括饮用和接触受污染的水体或口服受到污染的蓝藻类保健品，或特殊情况下通过静脉输入影响一些脆弱的透析患者。同时MC不仅可以在鱼体内蓄积，还会在虾、贝、蛤等软体动物体内蓄积，通过水产品的形式进入人体，从而对人类健康造成潜在的威胁。 目前对于微囊藻毒素代谢物及其解毒过程的研究，大多集中于体外实验，而且也局限于定性研究，对于定量研究报道较少。同时由于微囊藻毒素及其代谢产物在生物样品中的浓度通常很低，干扰物质较多，因而特别需要建立可靠、稳定的分析方法，并通过有效的分离、纯化、富集过程实现高灵敏度、高专属性分析。本论文实验的目的主要是对微囊藻毒素在动物体内吸收、分布、代谢和排泄等过程进行探讨并建立高效的分析检测方法，分别研究了微囊藻毒素在鱼和大鼠体内组织和生物流体（血浆和尿等）中的分布和代谢情况。建立了定量测定鱼组织、大鼠血浆、尿样和组织中微囊藻毒素及其代谢产物的LC/MS/MS方法。同时利用液相色谱-离子阱质谱定性研究了大鼠尿样中微囊藻毒素及其代谢产物。并根据实验需要系统研究了微囊藻毒素的提取和纯化，实现毫克级制备，为开展微囊藻毒素代谢及毒理学研究奠定了基础。 1、本研究利用凝胶色谱的独特的色谱保留行为，发展了基于柱色谱技术的微囊藻毒素的分离提纯方法。该方法简便、高效、使用溶剂简单，便于溶剂的回收利用，减少环境的污染。相对现有方法更为经济、环保。制备了两种微囊藻毒素的纯品，其纯度经液相色谱检测，纯度均大于95%，方便了后续代谢、毒理研究的展开。通过麦克尔加成反应合成了一系列微囊藻毒素的代谢产物，为定性、定量研究MC-LR及其代谢物提供了纯品。首次利用离子阱质谱强大的定性功能，对以上一系列化合物进行了多级扫描，对相关碎片离子峰进行了归属。既确定了以上化合物的结构，又比较了它们在（+）-ESI 条件下的裂解机理，为分析和鉴定生物样品中微囊藻毒素及其代谢产物提供了基础。 2、利用固相萃取（SPE）、液相色谱-离子阱串接质谱等手段首次建立了同时测定鱼组织中MC-LR及其谷胱甘肽结合物的分析方法。比较了不同提取溶剂对分析物样品回收率的影响，优化了色谱和质谱条件，从而可在较低浓度下检测微囊藻毒素及其谷胱甘肽结合物产物。利用上述方法测定了腹腔注射的鲫鱼体内肝脏和肾脏等主要代谢器官中MC-LR及其谷胱甘肽结合产物的含量，确定了其浓度-时间分布曲线。 3、通过蛋白质沉淀与固相萃取（SPE）组合净化，液相色谱-离子阱串接质谱检测，建立了在大鼠血浆中同时测定MC-RR、-LR、MC-[Dha7]-LR的分析方法，利用该方法研究了大鼠血浆、肝、肾等组织中MC-RR、-LR、MC-[Dha7]-LR的含量和分布。 4、利用液相色谱-离子阱串接质谱定性检测了大鼠尿样中微囊藻毒素及其代谢产物。确证了大鼠尿样中MC-LR-GSH和MC-LR-Cys结合产物的存在。改进了样品制备、纯化过程，优化了实验步骤，对分析方法的选择性、回收率、检测限、精密度和基质效应等指标进行评价；建立了大鼠血浆和尿中MC-LR及其谷胱甘肽结合产物的LC/MS/MS方法，并利用该方法定量研究了腹腔注射的Wistar大鼠血浆和尿样中MC-LR及其谷胱甘肽结合产物的含量与分布。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 112 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12290]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 戴明. 液相色谱-质谱联用测定生物样品中肝毒性微囊藻毒素及其代谢物[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 2008. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
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