鲫两个新的干扰素诱导基因的表达调控及抗病毒功能研究
文献类型：学位论文
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| 作者 | 蒋珺 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2009-05-31 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 水生生物研究所 |
| 导师 | 桂建芳 |
| 关键词 | 鲫囊胚细胞 草鱼出血病病毒 IFN系统 干扰素诱导基因 Gig1基因 Gig2基因 表达调控 启动子 抗病毒功能 |
| 其他题名 | Expression regulation and antiviral function of two novel interferon-inducible genes in Crucian Carp (Carassius auratus L.) |
| 中文摘要 | 干扰素( Interferon, IFN )系统作为非特异性免疫系统的重要组成部分，是鱼类乃至所有脊椎动物抵抗病毒等病原体微生物入侵的第一道防线。本实验室已经成功建立了一个研究鱼类IFN系统的细胞模型。鲫囊胚细胞（Crucian carp (Carassius auratus L.) blastulae embryonic cells, CAB）在紫外线灭活的草鱼出血病病毒（Grass Carp Hemorrhage Virus, GCHV）诱导下能产生IFN和一系列抗病毒免疫相关的蛋白，并最终建立起抗病毒状态，抵抗病毒的入侵。Gig1（GCHV induced gene 1）和Gig2都是从这样的体系中克隆并鉴定出来的新的IFN诱导基因。GCHV、Poly I:C和粗制IFN（含有IFN的CAB细胞上清）都能诱导它们mRNA水平的上调表达。本文在此基础上，继续对Gig1和Gig2基因的表达调控和抗病毒功能进行了研究。 Gig1是在筛选灭活GCHV诱导CAB细胞的差减cDNA文库时出现频率最高的一个基因。它功能未知并且没有任何已知结构域。在原核表达系统中成功表达并纯化了Gig1蛋白。利用该蛋白免疫家兔成功获得了Gig1的特异抗体，并首次证实Gig1是能编码蛋白的基因。Real-time PCR和Western blot分析揭示灭活GCHV和Poly I:C能诱导Gig1 mRNA和蛋白的上调表达。细胞免疫化学和Western blot分析表明Gig1是一个胞质定位的蛋白。体内研究表明Gig1在草鱼各组织中遍在分布，Poly I:C能诱导各主要免疫相关组织中Gig1蛋白的上调表达。在CAB或鲤上皮瘤细胞系（Epithelioma papulosum cyprinid, EPC）中，瞬时转染过表达Gig1能抑制GCHV复制并保护细胞。通过搜索公共数据库发现目前Gig1是鱼类所特有的基因。所有研究结果表明Gig1是一个鱼类所特有的具有抗病毒功能的新的干扰素诱导基因。 Gig2是在筛选灭活GCHV诱导CAB细胞的差减cDNA文库时获得的又一个功能未知的基因。在原核表达系统中成功表达并纯化了Gig2蛋白。利用该蛋白免疫家兔成功获得了Gig2的特异抗体，并首次证实Gig2是能编码蛋白的基因。Western blot分析揭示灭活GCHV、Poly I:C和原核表达纯化的IFN蛋白都能诱导Gig2蛋白的上调表达。体内研究表明Gig2在草鱼各组织中遍在分布，Poly I:C能诱导各主要免疫相关组织中Gig2蛋白的上调表达。利用Genome walking的方法成功获得了Gig2上游859bp的启动子序列。进一步的序列分析显示Gig2启动子上有3个ISRE（IFN-stimulated response element）序列，5个GAS（gamma IFN activated sequence）序列，9个GAAA/TTTC结构，一个TATA-box和一个Sp1结合位点。利用启动子－报告基因的方法检测Gig2启动子活性，发现Poly I:C、IFN和IRF7都能诱导Gig2启动子活性的上调。这些研究结果进一步证实Gig2是一个新的IFN诱导基因，它在IFN介导的抗病毒免疫中可能起到重要的作用。此外，在Poly I:C和IFN诱导Gig2的表达中，IRF7可能起着重要的调节作用。 在大规模筛选灭活GCHV诱导CAB细胞的差减cDNA文库时，还发现了4个与Gig2有较高同源性的EST。利用RACE-PCR方法获得了它们的cDNA全长。灭活GCHV同样能诱导它们的上调表达，说明它们在抗病毒免疫反应中也可能有一定的作用。Gig2及Gig2同源基因很可能是一个在抗病毒免疫反应中有着重要作用的基因家族的成员。 本文取得的研究成果对进一步阐明鱼类IFN介导的信号通路、鱼类IFN介导的抗病毒机制、以至推动鱼类抗病药物的研制和抗病育种技术的建立有重要的理论指导意义。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 138 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12418]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 蒋珺. 鲫两个新的干扰素诱导基因的表达调控及抗病毒功能研究, Expression regulation and antiviral function of two novel interferon-inducible genes in Crucian Carp (Carassius auratus L.)[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 2009. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
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