鱼类T细胞标志基因的分子克隆及相关特性的研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 孙晓凤 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2008-06-12 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 水生生物研究所 |
| 导师 | 殷战 ; 郭琼林 |
| 关键词 | 转基因鲤鱼 抑制差减杂交 T细胞标志基因 斑马鱼 整体原位杂交 启动子 |
| 其他题名 | Molecular cloning and characterization of carp T-cell marker Genes |
| 中文摘要 | 转“全鱼”生长激素（GH）基因能明显促进鲤鱼胸腺发育，有效延缓胸腺退化。应用抑制性差减杂交技术构建了4月龄F3代转全鱼生长激素（GH）基因鲤鱼 (Cyprinus carpio L.)胸腺发育差减cDNA文库。并随机挑取了200多个PCR检测呈阳性的克隆进行了斑点杂交，选取斑点杂交阳性的克隆进行测序，挑选6个斑点杂交阳性克隆进行了RT-PCR验证和7个斑点杂交阳性克隆进行了虚拟Northern杂交，这7个基因全部呈差异表达阳性。 通过RACE快速末端扩增得到了差异表达基因CD8β、CD4、TCRγ、CD3γ/δ 4个T细胞标志基因的cDNA全序列。RT-PCR检测这些已经得到全长cDNA的基因，研究它们在成年鲤鱼中的组织分布,在被检测的几种免疫相关的组织中这几个基因均检测到转录产物，其中胸腺、鳃、和小肠表达较强。 通过对斑马鱼早期胚胎发育阶段的观察，发现在注射了330pg的GH mRNA后, 斑马鱼胸腺发育标志基因Rag1的表达获得显著增强，表明和证实了GH 对胸腺早期发育的促进作用。 运用斑马鱼CD8α和CD8β 的反义RNA探针，对受精后第4天和第5天的斑马鱼幼苗进行整体原位杂交观察, 检测到其在肠泡和脊索部位的表达，且该部位的表达可为免疫抑制剂地塞米松所抑制，并为GH所增强，表明了CD8+细胞在早期斑马鱼发育阶段形成于肠道和脊索的特性。 构建了从500bp到11kb不同长度的斑马鱼CD8β5'基因组片段驱动EGFP表达的转基因报告斑马鱼，仅在脊索部位有明显的荧光表达。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 122 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12426]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 孙晓凤. 鱼类T细胞标志基因的分子克隆及相关特性的研究[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 2008. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
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