鲫NUB1基因的克隆表达及IRF3和IRF7的亚细胞定位研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 甘力 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 2009-05-31 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 水生生物研究所 |
| 导师 | 张义兵 |
| 关键词 | 鲫 干扰素 干扰素刺激基因 诱导表达 亚细胞定位 |
| 其他题名 | Molecular cloning and characterization of NUB1 and subcellular localization of IRF3 and IRF7 in Crucian Carp (Carassius auratus L.) |
| 中文摘要 | 干扰素（Interferon, IFN）系统在鱼类非特异性免疫中发挥重要作用。本实验室已成功建立研究鱼类IFN系统基因的细胞模型系统，并分离和鉴定了一系列病毒诱导基因。本研究在此基础上,克隆鉴定了IFN系统基因NEDD8 Ultimate Buster-1 (NUB1)并对其诱导表达特性进行了分析，同时对另外两个IFN系统基因Interferon regulator factor3 (IRF3)和Interferon regulator factor7 (IRF7)的亚细胞定位进行了研究。 NUB1是近年来发现的一种干扰素诱导表达基因，哺乳类的研究表明，过量表达该基因能抑制细胞生长。本实验通过RACE-PCR方法从产生干扰素的鲫囊胚培养细胞(Carassius auratus blastulae embryonic cells, CAB)中克隆出鲫NUB1基因。鲫NUB1全长cDNA为2298bp,编码一个由589个氨基酸残基组成的蛋白。推导的鲫NUB1蛋白具有哺乳类同源蛋白保守的结构域，包括N端的UBL结构域(Ubiquitin like domain)和C端两个UBA结构域(Ubiquitin associated domain)，与已知的哺乳类包括人和小鼠、鸟类和两栖类的同源蛋白具有41-45%的相似性。诱导表达分析显示：Poly I:C和LPS均能诱导CAB细胞NUB1 mRNA的上调，表明NUB1基因在鱼类的抗病免疫反应中发挥某种重要作用。 IRF3和IRF7是哺乳类干扰素抗病毒信号通路中两个关键的调节因子，能够调控type I IFN和IFN刺激基因（Interferon stimulated genes, ISGs）的表达。本实验首先利用同源克隆法克隆了鲫IRF3基因， 其全长cDNA为1839bp, 编码一个由458个氨基酸组成的蛋白。推导的鲫IRF3蛋白具有哺乳类同源蛋白保守的结构域，N端DBD结构域（DNA binding domain）包含5个保守的色氨酸（Trp）重复序列。C端与其它物种的同源性较低，但也具有IAD结构域（IRF association domain）的核心序列。C端富含丝氨酸（Ser）残基，推测是磷酸化位点。其中DBD结构域的70-92氨基酸序列是一段富含K/R的序列（70NGDHSVWKRNFRSALRAKGFKM92），推测是一个核定位信号（nuclear localization signal, NLS）。软件推测I327可能与核输出信号（nuclear export signal, NES）相关。将IRF3与IRF7的ORF与GFP相连构建表达载体，转染COS7细胞，发现IRF3和IRF7主要定位在细胞质，转染5h加入100-300g/ml polyI:C诱导，19h后观察， IRF3和IRF7蛋白主要定位在细胞质，但均有少量定位在细胞核内。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 68 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12474]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 甘力. 鲫NUB1基因的克隆表达及IRF3和IRF7的亚细胞定位研究[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 2009. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
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