我国鱼类病原菌耐药性、耐药质粒及几种药物抗菌作用的研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 李爱华 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 1998 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 导师 | 沈韫芬 ; 王伟俊 |
| 关键词 | 鱼类病原菌 耐药性 耐药质粒 嗜水气单胞菌 河弧菌 环丙沙星 氯霉素 最低抑菌浓度 最低杀菌浓度 抗生素后效应 耐药突变 抗性发展 药代动力学 质粒特征图谱 |
| 学位专业 | 水生生物学 |
| 中文摘要 | 本论文包括以下几方面的研究内容：我国鱼类病原细菌的耐药性调查和分析：病原细菌对常用药物的抗性发展研究；药物的血液浓度与耐药性的关系；耐药质粒的检测；耐药质粒的生物学特性；耐药质粒的消除；质粒特征与耐药性的关系；海水、半咸水对抗菌药物抗菌作用的影响；环丙沙星和氯霉素的杀菌作用及抗生素后效应研究。具体结果如下：(1) 从不同地区分离收集到的35株鱼类病原菌(包括嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、鲁氏耶尔森菌、弧菌、假单胞菌和未定种病原菌)中，对青霉素和半合成青霉素、头孢菌素及万古霉素耐药的菌株比例最高，为85.7-94.3％。其中26株嗜水气单胞菌(A．hydrophila)对青霉素类和头孢菌素类药物全部具抗性，对万古霉素也多数不敏感。21种药物中最敏感的是氟哌酸、氯霉素、呋喃唑酮，总体耐药率分别只有5.7％、11.4％、11.4％；而A．hydrophila中这一数值分别为7.7％、7.7％和7.7％。氨基糖甙类药物和四环素类药物的耐药频率介于其间。对磺胺药的耐药菌比例也很高，为57.1％，其中有73.1％的A．hydroghila对磺胺及复方磺胺具有抗性，但耐磺胺比耐复方磺胺的现象更为普遍。同时对3种常用药物具有抗性的菌株比例最高。嗜水气单胞菌对环丙沙星和氯霉素非常敏感，MIC_(50)分别为：0.025μg/ml和0.25 ug/ml；MIC_(90)分别为0.12μg/ml和4.0μg/ml。四环素、土霉素、呋喃唑酮、链霉素的MIC_(50)虽然不高，分别只有1.0μg/ml、3.2μg/ml、0.8μg/ml、12.8 μg/ml，但MIC_(90)却很高，分别为8.0μg/ml、12.8μg/ml、6.4μg/ml以及50μg/ml以上。磺胺药的敏感性最低，虽然最低的MIC为4.Oμg/ml，但MIC_(50)高达62.5μg/ml，MIC_(90)更是在250μg/ml以上，对大多数病原菌已不敏感。(2)嗜水气单胞菌在分别含8 * MIC环丙沙星、链霉素的培养基中的自发突变率较低，分别为8.5 * 10~(-9)、4.2 * lO~(-8)；河弧菌(V. fluvialis)相应的数值为3.4 * lO~(-8)、6.4 * 10~(-7)。突变株的MIC增加了8-16倍．在本此试验的检测灵敏度范围内，未能检测到氯霉素的耐药突变子，其自发突变率分别小于1.1 * 10~(-9)和小于6.6 * lO~(-9)。环丙沙星选择出的突变株对其它药物的敏感性无明显变化，但对四环素类药物的敏感性有所下降，说明存在一定的交叉耐药性。经环丙沙星、链霉素、氯霉素选择了11代得到的A．hydrophila耐药突变株其MIC分别增加了128倍，32倍和32倍。而选择出的V. fluvialis其MIC均增加了64倍。经在无药培养基中连续传代8次，这些突变株的抗性均维持稳定。(3)药代动力学研究表明，氯霉素通过腹腔注射吸收良好，在草鱼和异育银鲫体内的半衰期分别为11.9h和11.1h。根据文献中耐药菌的判断标准以及本次试验中所得到的MIC_(90)计算了不同给药剂量所需的给药频率，即给药方案。(4)海水由于富含钙离子或镁离子可影响环丙沙星的抑菌效果，然而钙离子或镁离子与环丙沙星的结合是可逆的，一旦用蒸馏水稀释后，环丙沙星将从结合状态逐渐转变为游离状态，又恢复杀菌活力。生理盐水对环丙沙星的抑菌作用也有不良影响。此外，生理盐水、半咸水和海水对氯霉素、四环素、土霉素和磺胺的抗菌作用也有不同程度的影响，这种影响与细菌的种类也有关系。呋喃唑酮的抗菌作用不受影响。(5)环丙沙星对A．hydrophila的MBC=2 * MIC，为0.0244μg/ml：对V. fluvialis的MBC=4 * MIC，为O.0244μg/ml。2倍MIC以上的氯霉素对A．hydrophila和V. fluvialis也具有杀菌作用，对A．hydrophila的MBC为O.78μg/ml；对V. fluvialis的MBC为1.56μg/ml，但即使16* MIC的氯霉素28 ℃处理28小时也不能将细菌完全杀灭，这些是对氯霉素抗菌作用新的认识。环丙沙星对静止期的A．hydrophila和V. fluvialis也有杀灭作用。lO倍MIC浓度的环丙沙星对A．hydrophila作用2小时，即可将细菌数量减少到10％以下，随着作用时间的延长，细菌数量进一步减少。说明环丙沙星对敏感的A．hydrophila具有强大而快速的杀灭作用。(6)环丙沙星和氯霉素都具有抗生素后效应，而且随着药物处理时间的延长，两种药物的抗生素后效应越明显。10 * MIC环丙沙星处理0.5h、1.0h、2.0h后，PAE在0.22-1.1小时之间；4 * MIC氯霉素处理O.5h、1.Oh、2.Oh后，PAE在0.95-2.3小时之间，两种药物均表现为处理时间越长，PAE越大。1/4 * MIC、4 * MIC、10 * MIC的环丙沙星处理2小时后，PAE在O.64-0.90小时之间，组间差异不明显。(7)采用细菌接合试验从只从l株A．hydrophila CJ26中检测到了可自身转移的耐药质粒。该耐药质粒被命名为pWH9601，它具有四环素和磺胺两种抗性标记。这是国内关于鱼类病原菌耐药质粒的首次报道。该质粒最快可在15分钟内完成传递；传递频率与温度有关，但在12 ℃时也可发生转移，温度在20 ℃以上时，转移频率明显升高。质粒pWH96101对四环素的抗性可被1 μg／ml浓度的四环素类药物所诱导。(8)采用两种方法试验了氟哌酸和利福平对耐药质粒的消除效果，获得了A．hydrophiia CJ26的R质粒消除株，但两种药物对该质粒的消除效果均不够理想。不过，本研究发展了一种用于该项研究更简便、更有效的试验方法，可为今后的研究提供便利。质粒消除株在与原质粒携带株的混合培养过程中，前者又可逐渐获得耐药质粒。说明质粒消除剂的作用只是暂时的，需要寻找消除作用更强的药物。(9)对12株A．hydrophila的质粒特征分析发现，这些菌株均只含有1-2种质粒或不含质粒。根据质粒的有无、大小及组成，质粒图谱分为4种类型。质粒特征与耐药谱之间存在一定的相关性，但其耐药性可能与质粒无关。质粒特征与菌株来源有关，而且发现多数A．hydrophila具有一共同的小质粒，这在流行病学上可能具有一定意义。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 140 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12520]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 李爱华. 我国鱼类病原菌耐药性、耐药质粒及几种药物抗菌作用的研究[D]. 中国科学院水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 1998. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
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