电脉冲-精子介导转基因与转pCAhLFc草鱼抗出血病的研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 钟家玉 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 2001 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 导师 | 朱作言 |
| 关键词 | 转基因 电脉冲 精子 稀有鮈鲫 人类乳铁蛋白 草鱼出血病 攻毒 |
| 学位专业 | 遗传学 |
| 中文摘要 | 本文共五章，包括以下主要研究内容：用稀有鮈鲫和草鱼发展和优化一种简便易行的转基因方法，即电脉冲-精子介导转基因法；研制转人类乳铁收白基因草鱼，并在其鱼种阶段检测其抗病力：以稀有鮈鲫为实验材料，进一步研究电脉冲-精子介导转基因法的机制。第一章：综述近年在鱼类转基因方法上的研究进展，各种转基因方法的优势与不足，人类乳铁蛋白hLF的生理功能的研究进展，草鱼出血病的研究现状。第二章：重组质粒pCAhLFc的构建，将我国鲤科“全鱼”重组质粒，即草鱼生长激素cDNA与鲤鱼的β-肌动蛋白基因启动子的重组体（pCAgcGHc）的启动子部分pCA和人类乳铁蛋白cDNA（hLFc）连接起来，构建为重组质粒pCAhLFc。第三章：以稀有鮈鲫为实验材料，优化电脉冲-精子介导转基因法的参数，并对这种方法的机制进行探讨。将稀有鮈鲫精子与重组质粒pCAhLFc线性DNA混和温育，经不同条件的电脉冲处理后，与卵子受精，孵化出苗，PCR检测，结果表明25.5%～66.7%鱼苗带有外源基因。用显微镜观察精子的活力并统计受精率，发现不同的电脉冲条件对精子有不同的损害作用。用DNA外切酶消化电脉冲处理过的精子。证明电脉冲可以促使精子摄入外源基因。与显微注射相比较，在卵子质量不高的条件下，电脉冲-精子介导转基因法获得较高的出苗率。第四章：通过电脉冲-精子介导转基因获得转pCAhLFc草鱼，并设置不同的电脉冲参数组合对这种方法进行优化。将草鱼精子与重组质粒pCAhLFc线性DNA混和，经电脉冲处理，与卵子受精，得到若干草鱼苗。将草鱼苗匀浆，进行PCR检测，结果表明19.6～46.8%的鱼苗带有外源基因。本实验获得的最佳实验参数是：外源基因在精液中的浓度为200ng/μl，电脉冲参数设置为10kV、12*4个循环、2~(10)脉冲/循环、0.4sec，此时鱼苗的阳性率可高达46.8%。第五章：用草鱼出血病病毒GCHV对5月龄的转pCAhLFc草鱼和对照组草鱼进行攻击性毒性实验，发现5月龄的转pCAhLFc草鱼抵抗GCHV的能力比对照鱼高。本文通过对上述问题的研究，发展了一种更简单快捷易行的转基因方法，并探讨了这种方法的机制；探索了转pCAhLFc增强草鱼抗出血病病毒能力的可行性，为从另一个角度培养抗GCHV草鱼品系打下了基础。有待进一步研究的问题包括：①用电脉冲-精子转基因法转入的外源基因的行为（如复制、整合和遗传等）和别的途径（如显微注射法）的有无差别；②hLFc在草鱼体内的表达量和抗GCHV能力的相关性；③将电脉冲-精子转基因法和基因定点整合技术结合起来研制抗病转基因草鱼品系的培育。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 66 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12610]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 钟家玉. 电脉冲-精子介导转基因与转pCAhLFc草鱼抗出血病的研究[D]. 中国科学院水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 2001. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
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