草鱼四倍化细胞株的建立和泥鳅四倍体胚胎的获得
文献类型：学位论文
| 作者 | 董惠芬 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 1989 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 导师 | 陈宏溪 |
| 关键词 | 草鱼 泥鳅 电融合 极化注射 四倍体 |
| 学位专业 | 水生生物学 |
| 中文摘要 | 本文报导以草鱼肾脏培养细胞系（GCK-84）。大鳞付泥鳅（Paramisgurnus dabryanus），鳗尾泥鳅（Misgurnus anguillicaudatus），白鲫、红鲫及其相互交的囊胚细胞及其未受精卵为材料，运用电融合法和极化注射法，获得草鱼四倍分细胞株和泥鳅四倍体原肠胚等的初步研究结果。1、在本实验室现有条件下，运用正交试验法，分别对草鱼GCK-84细胞系和泥鳅囊胚细胞电融合的最适条件进行研究。其结果是：对于细胞密度为4.2 * 10~5个/ml的GCK-84细胞，预先用40ug/ml的PronaseE在25 ℃下处理10分钟， 在0.2M甘露与8 * 10~(-6)M氯化钙（CaCl_2）配成的电场液中，二核体的比例最高，平均可达40.13%；在这四个因子中细胞密度对二核体比例的影响最为重要，Ca~(2+)浓度的影响也较显著，甘露醇浓度的影响最小。泥鳅囊胚细胞的最佳条件是：在温度为18 ℃时，每毫升2.5 * 10~4个细胞，在0.2M甘露醇为8 * 10~(-5)MCaCl_2配成的电场液中，二核体比例最高可达58.00%，平均为50.99%。这些因子中甘露醇的浓度对实验结果的影响最大，Ca~(2+)浓度的影响最小。2、泥鳅囊胚细胞电融合处理后，随培养时间的延长，二核体中核融合的百分率增加，由1小时的35%增加到6.5小时的84%；而细胞的存活率随时间的延长而下降，由1小时的88%下降到6.5小时的60%。3、运用极化注射法，把融合后的细胞核注射入未受精卵后，能比较正常地发育到囊胚期的卵，从一开始的4%提高到51%，最后提高到88%， 有37.13%的囊胚可继续发育到原肠胚，极少数能孵出鱼苗。对发育到囊胚-原肠期的胚胎，经单个胚胎染色体制片检查证明：染色体数目在90-96条之间；这些染色体加倍了的胚胎占检查胚胎的28%。4、泥鳅的二倍体囊胚细胞核注入未受精卵后所得的鱼，剪尾鳍检查染色体发现：71%以上的分裂相，染色体数目与供体细胞核一样，说明此实验鱼是二倍体鱼。5、在无菌条件下，GCK-84(2n = 48 - 64)融合后进行克隆培养，在54个克隆中筛选出六个四倍化克隆株，染色体分别为96、100、104、108、116、124条，迄今传至第9代。培养细胞的电融合与四倍化细胞的成功筛选，为人工诱导与建立四倍体细胞株提供了另外一种方法。随着短期培养细胞工程鱼囊胚细胞四倍体鱼的成功，培养细胞四倍体工程鱼也会在不久的将来获得成功，这将为人工诱导四倍体鱼开辟一条新途径。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 52 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12774]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 董惠芬. 草鱼四倍化细胞株的建立和泥鳅四倍体胚胎的获得[D]. 中国科学院水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 1989. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
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