CroE Like Chaperomns在几种藻中的存在、性质及其功能的研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 赵若虹 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 1993 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 授予地点 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 导师 | 黎尚豪 |
| 关键词 | 核酮糖－1 类似groE蛋白的分子伴侣 蓝藻 绿藻 纯化 特性 定位 5二磷酸羧化酶／加氧酶亚基结合蛋白 |
| 学位专业 | 水生生物学 |
| 中文摘要 | 豌豆叶片于4 ℃缓冲液中（20 mmol／L Tris-HCl，pH 7.8 5 mmol/L巯基乙醇）提取，提取液在50 ℃水浴中加热10分钟后，12,000 * g离心15分钟，上清液经38％－70％饱和度的（NH_4）_2SO_4分级分离后，沉淀溶于少量缓冲液中，经过Sephadex G－50柱脱盐后，再用DEAE-Sepharose fast flow和Sephacryl S－300柱层析分离，收集RubisCO亚基结合蛋白峰部分。纯化的RubisCO亚基结合蛋白用ND－PAGE及ATP使其解离的特性来鉴定。提纯的RubisCO亚基结合蛋白的得率是20 mg／1.0 kg叶片，比以前报道的高12倍。以纯化的豌豆RubisCO亚基结合蛋白制备出高度专一的多克隆抗体。免疫双扩散结果证明，该抗体仅与RubisCO亚基结合蛋白有一条免疫沉淀线，而与RubisCO无免交叉反应。用此抗体对绿藻Chlamydomonas reinhardtii和多种蓝藻细胞提取液作Western blot分析，结果表明，在绿藻Chlamydomonas reinhardtii和Anabaena siamensis等丝状蓝藻中存在一与豌豆RubisCO结合蛋白具有相似抗原性的蛋白，且亚基分子量相似，均为61KD左右，而在单细胞蓝藻（如Anacystis nidulans）中并不存在这种同源蛋白（groE-like chaperonin）。多细胞蓝及绿藻中这一groE-like chaperonin具有在热致死温度下含量增加，经冰冻处理后不稳定的性质。我们用提纯的豌豆RubisCO亚基结合蛋白进行热稳定性实验，结果发现，该蛋白同样是一热稳定蛋白，并在低温下容易解离。这一结果说明，高等植物的RubisCO亚基结合蛋白藻类的groE-like chaperonin在蛋白的组成结构及性质方面都有一定的同源性。我们用豌豆RubisCO亚基结合蛋白的抗体进行免疫金标记亚显微观测，结果表明，groE- like chaperonin在绿藻Chlamydomonas reinhardtii内主要分布于蛋白核区域及类囊体内；在蓝藻Anabaena siamensis细胞中仅均匀分布于营养细胞，而在成熟的异形胞中并不存在。用水稻RubisCO抗体进行Protein-A免疫金标记，观测表明，RubisCO在在蓝藻Anabaena siamensis细胞中主要分布于营养细胞的羧化体内，而在成熟的异形胞中不存在；RubisCO在绿藻Chlamydomonas reinhardtii中主要分布于蛋白核区域。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-16 |
| 页码 | 65 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12868]  |
| 专题 | 水生生物研究所_中科院水生所知识产出（2009年前）_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 赵若虹. CroE Like Chaperomns在几种藻中的存在、性质及其功能的研究[D]. 中国科学院水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所. 1993. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
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