鳜的两种抗菌肽和白介素-8 基因的克隆及功能研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 王改玲 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2010-11 |
| 授予单位 | 中国科学院水生生物研究所 |
| 导师 | 聂品 |
| 关键词 | 鳜 β 防御素 Hepcidin 白介素-8 基因克隆 组织表达 功能分析 |
| 其他题名 | Cloning and functional analysis of two antimicrobialpeptides and interleukin-8 in mandarin fish(Siniperca chuatsi) |
| 中文摘要 | 鳜(Siniperca chuatsi)是我国重要的淡水经济养殖鱼类之一，对其先天免疫系 统相关分子的研究在理论和应用方面均具有重要的意义。本研究克隆了鳜两种抗 菌肽基因，β 防御素(β-defensin)和hepcidin，以及CXC 型趋化因子白介素-8 基因 (interleukin-8, IL-8)，对基因的表达特性进行了分析，并对β 防御素和白介素-8 的功能进行了研究。 通过RT-PCR 和RACE-PCR 技术获得了鳜β 防御素、hepcidin 和白介素-8 的cDNA 全长，并采用Genome Walking 的方法获得了三个基因的基因组序列和 β 防御素的启动子区域，分析了三个基因的基因组结构。利用原核和真核表达技 术获得了β 防御素和IL-8 的重组蛋白，分别研究了其抑菌活性和趋化活性。 鳜β 防御素(Siniperca chuatsi β-defensin, ScBD)基因组全长1197 bp，包含三 个外显子和两个内含子，开放阅读框包含192 bp，编码63 个氨基酸，由20 个氨 基酸的信号肽和43 个氨基酸的成熟肽组成。启动子区域包含与抗细菌和抗病毒 转录调控相关的转录因子结合位点，如：NF-κB、Sp1、C/EBP-β和IRF-1 等。健 康鳜的ScBD mRNA 在各个组织中呈组成型表达，并且主要表达于脾脏，LPS 刺 激之后在肝脏、鳃、肠、脾脏和肌肉(含皮肤)中呈上调表达，在肌肉(含皮肤)中 表达量最高。利用原核表达的ScBD 重组蛋白制备的鼠多克隆抗体，经Western Blot 技术检测到ScBD 蛋白表达于脾脏、头肾和鳃中。原位杂交技术检测到ScBD 阳性细胞主要分布于脾脏组织血管周围的黑色素巨噬细胞中心内，头肾组织的小 血管内。真核重组表达质粒pcDNA3.1-ScBD 转染HEK 293T 细胞，分泌表达的 蛋白对大肠杆菌M15 有抑菌作用。 鳜hepcidin 基因组全长980 bp，包含三个外显子和两个内含子，开放阅读框 包含261 bp，编码86 个氨基酸，由信号肽、前导肽和成熟肽组成。鳜hepcidin mRNA 在健康组织内呈组成型表达，并且在肝脏中的表达量最高，在LPS 刺激 之后的肠和鳃组织中呈上调表达。 鳜IL-8 基因组全长1164 bp，包含四个外显子和三个内含子，开放阅读框包 含300 bp，编码99 个氨基酸，含有22 个氨基酸的信号肽和77 个氨基酸的成熟 肽。鳜IL-8 前两个半胱氨酸形成典型的CXC 型结构，在第一个半胱氨酸上游有ELR 特征基序。IL-8 mRNA 在健康鳜的头肾中表达量最高，在LPS 刺激后的 头肾、鳃和脾脏中呈上调表达。原核表达的鳜IL-8 重组蛋白在浓度为15 ng/mL 时对头肾白细胞具有明显的趋化作用，主要趋化淋巴细胞。IL-8 重组蛋白在浓度 为1500 ng/mL 时可以诱导促炎因子IL-1β 和TNFα 表达。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-12-08 |
| 页码 | 122 |
| 源URL | [http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12948]  |
| 专题 | 水生生物研究所_鱼类生物学及渔业生物技术研究中心_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 王改玲. 鳜的两种抗菌肽和白介素-8 基因的克隆及功能研究[D]. 中国科学院水生生物研究所. 2010. |
入库方式： OAI收割
来源：水生生物研究所
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