弧菌琼胶酶和丝氨酸蛋白酶的筛选、分析以及免疫应用
文献类型：学位论文
| 作者 | 张卫卫 |
| 答辩日期 | 2009-05-21 |
| 文献子类 | 博士 |
| 授予单位 | 中国科学院海洋研究所 |
| 授予地点 | 海洋研究所 |
| 关键词 | 琼胶酶 丝氨酸蛋白酶 分泌序列 牙鲆 病原菌 |
| 其他题名 | The Application of Agarase and serine protease from Vibrio sp in the Immunoprotect of the Japenese Flounder |
| 英文摘要 | 从山东黄岛海水养殖场分离到一株弧菌V134，从中克隆得到琼胶酶基因agaV，并将其在大肠杆菌中表达，纯化得到重组的琼胶酶AgaV。酶活分析发现该琼胶酶的最适温度在40℃左右，对pH比较敏感，pH 7.0时具有最高的琼胶裂解活性。对AgaV进行了两种应用性探索：（1）利用AgaV从琼脂糖凝胶中回收DNA，回收效率可达90%以上；（2）利用agaV作为报告基因构建了捕获分泌序列的载体pBU，并用其从革兰氏阳性细菌（G+菌）和革兰氏阴性细菌（G-菌）中筛选出了一系列分泌蛋白。将利用pBU从一株哈维氏弧菌T4中筛选出的6个分泌蛋白分别进行基因克隆、蛋白表达纯化和牙鲆免疫实验，发现其中一个蛋白，命名为DegQVh，具有免疫保护效应，其免疫保护率（RPS）可达64%。为了提高DegQVh的免疫保护效应，将AgaV的分泌结构域与DegQVh融合，构成融合抗原AgaV－DegQVh。利用大肠杆菌作为载体菌构建了AgaV－DegQVh融合抗原递呈系统，用其作为疫苗进行免疫，发现其RPS可达到95%。酶活分析表明DegQVh在50℃、pH 8.0时具有最高的活性。突变分析表明83位的组氨酸、113位的天冬氨酸和188位的丝氨酸以及两个PDZ结构域是DegQVh活性所必需的。表达分析发现degQVh表达受温度和细胞浓度调控，并且其上游有一个受E调控的启动子。进一步的分析发现DegQVh能够与大肠杆菌的DegP功能互补。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-04 |
| 页码 | 122 |
| 源URL | [http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/852]  |
| 专题 | 海洋研究所_海洋环流与波动重点实验室 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 张卫卫. 弧菌琼胶酶和丝氨酸蛋白酶的筛选、分析以及免疫应用[D]. 海洋研究所. 中国科学院海洋研究所. 2009. |
入库方式： OAI收割
来源：海洋研究所
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