迟缓爱德华氏菌铁调控蛋白与溶血素调控蛋白的分子生物学研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 王芳 |
| 答辩日期 | 2008-06-07 |
| 文献子类 | 博士 |
| 授予单位 | 中国科学院海洋研究所 |
| 授予地点 | 海洋研究所 |
| 关键词 | 迟缓爱德华氏菌 Fur基因 启动子 定点突变 功能域 功能互补 自我调控 过量表达 外膜蛋白 溶血素 Gntr |
| 英文摘要 | 爱德华氏菌病是海水养殖鱼类牙鲆（Japanese flounder）的一种常见细菌病。迟缓爱德华氏菌的致病相关因子有凝血素、溶血素、铁载体、粘附素及侵袭素等，其中调控铁载体的蛋白即是铁调控蛋白（Ferric uptake regulator）Fur。 本论文首先用简并PCR及染色体步移的方法获得了迟缓爱德华氏菌fur基因(etfur)(GenBank 号EF197912)，发现其氨基酸序列与大肠杆菌的fur基因(ecfur)的氨基酸序列有大约90％的相似性。功能分析表明迟缓爱德华氏菌Fur（Etfur）能与大肠杆菌的Fur(Ecfur)功能互补；功能域分析发现Etfur的C92和C95为功能所必需，而E112K突变则增强FurEt的抑制功能；启动子活性分析发现Etfur具有自我调控功能，随之通过定点突变及引物延伸的方法确定了etfur的启动子。为了研究Etfur的调控干扰作用，我们构建了Etfur过量表达菌株TX1/pJRTF,发现该菌株的生长速度明显比野生型菌株慢，而且其外膜蛋白的表达与野生型相比有明显差异；随后我们提取了差异蛋白，用反免疫方法筛选差异表达基因。进一步的毒力研究表明Etfur过量表达能使细菌毒力显著下降。分析迟缓爱德华氏菌溶血素基因(ethB)启动子活性发现Etfur能够调控ethB的表达。最后，我们构建了一个调控抑制子筛选系统，并由此筛选到另一个ethB调控因子EthR,该调控因子属于GntR调控蛋白家族；实验分析表明EthR是一个比Fur效应更强的调控因子。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-04 |
| 页码 | 109 |
| 源URL | [http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/1000]  |
| 专题 | 海洋研究所_海洋环流与波动重点实验室 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 王芳. 迟缓爱德华氏菌铁调控蛋白与溶血素调控蛋白的分子生物学研究[D]. 海洋研究所. 中国科学院海洋研究所. 2008. |
入库方式： OAI收割
来源：海洋研究所
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