胸苷酸合成酶和二氢叶酸还原酶mRNA亲和肽的发现及mRNA体外展示技术的优化
文献类型：学位论文
| 作者 | 王征 |
| 答辩日期 | 2008-06-11 |
| 文献子类 | 博士 |
| 授予单位 | 中国科学院海洋研究所 |
| 授予地点 | 海洋研究所 |
| 导师 | 林秀坤 |
| 关键词 | 噬菌体展示 Mrna体外展示 胸苷酸合成酶 二氢叶酸还原酶 |
| 学位专业 | 海洋生物学 |
| 其他题名 | Discovery of peptides bind thymidylate synthase and dihydrofolate reductase and optimization of mRNA display |
| 英文摘要 | 胸苷酸合成酶（thymidylate synthase，简称TS）和二氢叶酸还原酶（dihydrofolate reductase, 简称DHFR）都是叶酸依赖性酶，在维持DNA合成和DNA修复上发挥关键作用，并且多年来一直是肿瘤研究和化疗的重要靶点。我们前期的研究发现，TS和DHFR在翻译水平上存在负反馈调控机制。人TS和DHFR可以与其自身的mRNA结合，从而抑制mRNA的表达，化疗药物可以与TS或者DHFR相互作用，形成的复合物不能与TS mRNA结合， 使负反馈机制丧失。因此深入研究TS和DHFR的翻译调控机理，对阐明肿瘤抗药性机制，对发现新的抗肿瘤药物和肿瘤的治疗都具有十分重要的意义。 本论文利用mRNA体外展示技术，构建多肽库（约10万亿种多肽分子），利用多种实验手段将mRNA体外展示技术进行优化，提高了多肽库融合肽的产量，提高了mRNA体外展示技术筛选的特异性。将TS mRNA分子上的顺式因子TS30 RNA固定于磁珠上，将融合肽库与顺式因子作用，经过6轮循环，由多肽库中获得了与TS mRNA高度亲和的多肽序列，体外结合实验证明亲和肽可以与TS全长mRNA结合，体外翻译实验证明多肽可以抑制TS mRNA的翻译。并且利用phage display技术由噬菌体肽库（12个氨基酸随机肽库）经过四轮筛选，分别筛选到TS和DHFR的亲和肽，凝胶阻滞实验证明它们分别能与TS和DHFR mRNA结合。 本论文利用的展示技术可以广泛应用于特异靶点的蛋白质筛选，并且本论文筛选到的TS和DHFR亲和肽可以作为TS和DHFR的抑制剂，从而为获得新型的抗肿瘤药物奠定基础。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-11-04 |
| 页码 | 97 |
| 源URL | [http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/1468]  |
| 专题 | 海洋研究所_海洋环流与波动重点实验室 |
| 作者单位 | 中国科学院海洋研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 王征. 胸苷酸合成酶和二氢叶酸还原酶mRNA亲和肽的发现及mRNA体外展示技术的优化[D]. 海洋研究所. 中国科学院海洋研究所. 2008. |
入库方式： OAI收割
来源：海洋研究所
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