MicroRNA (miRNA) 作为转录后调控的重要手段，广泛参与生物体多种生理过程的调控。在病原与宿主的博弈过程中，miRNA同样扮演着重要角色。实验室前期研究发现了大量免疫调控相关的牙鲆miRNAs。在此基础上，本研究鉴定了两条参与迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda, E. tarda）感染过程的牙鲆miRNAs，pol-miR-194a和pol-miR-3p-2，并探索了二者的调控机制及在E. tarda感染过程中的免疫调控作用。

我们首先检测了pol-miR-194a对E. tarda感染的响应。通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）的方法，发现在E. tarda感染24 h后，牙鲆的肝脏、脾脏和鳃中pol-miR-194a的表达量均显著上调。利用荧光素酶报告实验，我们发现pol-miR-194a能够与干扰素调节因子7（Interferon regulatory factor 7， IRF7）的3’UTR相互作用，表明IRF7是pol-miR-194a的一个靶基因。同时，通过对IRF7靶序列及pol-miR-194a种子序列的突变实验，证明了pol-miR-194a与IRF7-3’UTR的相互作用依赖于完整的种子序列。进一步研究发现，在牙鲆鳃细胞系FG-9307细胞中过表达pol-miR-194a后，内源性IRF7的蛋白表达水平显著降低。为了验证pol-miR-194a对IRF7下游信号通路的调控，将pol-miR-194a mimic（pol-miR-194a模拟物）和I型干扰素的启动子报告质粒共转染到FG-9307细胞中，结果发现pol-miR-194a mimic能够显著抑制I型干扰素启动子的活性。通过体外过表达实验和胞内复制实验，我们发现pol-miR-194a能够增强E. tarda在宿主细胞内的复制。以上实验表明，pol-miR-194a表达受E. tarda调控，而pol-miR-194a下调牙鲆IRF7和I型干扰素的表达，进而降低牙鲆的抗感染免疫应答，最终促进E. tarda的胞内复制。

自噬在多种生理过程中发挥重要作用，如生长发育、肿瘤发生、炎症反应以及病原感染与宿主的免疫调控等。在本研究中，我们发现E. tarda感染能够诱导牙鲆脾脏免疫细胞和牙鲆FG-9307细胞系的自噬现象。p53在自噬过程中发挥着重要作用，同时被预测为牙鲆pol-miR-3p-2的靶基因。利用qRT-PCR实验，我们发现在E. tarda感染24 h后，牙鲆的肝脏、脾脏和鳃中pol-miR-3p-2的表达量均显著上调。通过荧光素酶报告实验和western blot分析，我们确认p53是pol-miR-3p-2的靶基因。在FG-9307细胞中过表达pol-miR-3p-2能够激活细胞自噬。进一步研究发现，在FG-9307细胞中敲降p53后，自噬关键蛋白Beclin的表达水平上调；在HEK293T细胞中异源表达实验进一步确认p53敲降能够上调Beclin的表达。通过体外过表达实验结合胞内复制实验，我们发现pol-miR-3p-2能够抑制E. tarda的胞内复制。以上结果表明，E. tarda感染能够促进pol-miR-3p-2的表达，进而下调p53蛋白表达，并上调Beclin的表达，从而促进牙鲆免疫细胞发生自噬，抑制E. tarda的胞内复制。

综上所述，我们阐释了两条牙鲆miRNAs, pol-miR-194a和pol-miR-3p-2，的调控机制，并揭示了二者在E. tarda感染过程中的作用。这些研究结果促进了我们对鱼类miRNAs作用机制以及E. tarda感染机制的理解。