柞蚕核型多角体病毒B-ORF6L、ptp、lef-12基因克隆及表达
文献类型：学位论文
| 作者 | 石生林 |
| 答辩日期 | 2005-05-30 |
| 文献子类 | 博士 |
| 授予单位 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 |
| 授予地点 | 沈阳应用生态研究所 |
| 关键词 | 杆状病毒 基因表达 病毒蛋白 |
| 其他题名 | Cloning and expression of Antheraea pernyi nuclear polyhedrosis virus(ApNPV) B-ORF6L, ptp and lef-12 genes |
| 英文摘要 | 本研究克隆了柞蚕核型多角体病毒（Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus，ApNPV）基因组pstⅠ-B、pstⅠ-C、pstⅠ-J三个片段，测序分析了pstⅠ-B、pstⅠ-C片段全序列及pstⅠ-J片段一端序列。ApNPV pstⅠ-C片段长6663 bp，包括9个完整ORF及2个不完整ORF；ApNPV pstⅠ-B片段长7406 bp，包括5个完整ORF及2个不完整ORF。ApNPV pstⅠ-J片段末端测定的954 bp序列包括lef-12完整序列及p47和gta部分序列。本研究共鉴定21个ApNPV ORF序列，其中20个属首次报道，占ApNPV已报道基因数的50％。编码ORF同源性分析及克隆片断ORF组成、基因排列顺序分析表明ApNPV与鳞翅目NPV第Ⅰ类群中的OpMNPV、CfMNPV、CfDefNPV、EppoNPV关系较近。 本研究克隆了ApNPV B-ORF6L、ptp-1、ptp-2及lef-12 四个基因，并对这四个基因在柞蚕蛹体内的表达进行了转录分析，结果表明：ApNPV ptp-1、lef-12是早期基因，B-ORF6L、ptp-2是晚期基因。本研究将ApNPV B-ORF6L、ptp-2亚克隆至原核表达载体，并在大肠杆菌中获得高效表达。SDS-PAGE及Western blot分析表明：PTP-2原核表达分子量与预测分子量相符，B-ORF6L融合表达分子量较预测的分子量偏大。以原核表达的B-ORF6L、PTP-2蛋白作为抗原，成功制作了B-ORF6L和PTP-2蛋白兔多克隆抗血清。ApNPV蛋白组分印迹分析表明：B-ORF6L参与包涵体膜及ODV结构组成，是ApNPV结构蛋白；PTP-2不参病毒结构组成。 分子系统发育分析表明，杆状病毒分为4个大的类群，ApNPV属于鳞翅目NPV第Ⅰ类群，与OpMNPV、CfMNPV、CfDefNPV、EppoNPV关系较近，与AcMNPV、RoMNPV、BmNPV关系稍远。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-12-15 |
| 页码 | 115 |
| 源URL | [http://210.72.129.5/handle/321005/2295]  |
| 专题 | 沈阳应用生态研究所_沈阳应用生态研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 石生林. 柞蚕核型多角体病毒B-ORF6L、ptp、lef-12基因克隆及表达[D]. 沈阳应用生态研究所. 中国科学院沈阳应用生态研究所. 2005. |
入库方式： OAI收割
来源：沈阳应用生态研究所
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