L-山梨糖还原酶基因在大肠杆菌中的表达及融合蛋白的酶学特性
文献类型：期刊论文
| 作者 | 刘耀平,张丹,周亚凤,徐明凯,张成刚 |
| 刊名 | 应用与环境生物学报
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| 出版日期 | 2004-06-28 |
| 期号 | 03页码:413-419 |
| 关键词 | 葡萄糖酸杆菌基因文库 L-山梨糖还原酶 酶学特性 固定化金属亲和层析技术 |
| 英文摘要 | 为获得L 山梨糖还原酶 (SR)整个操纵子序列 ,以 pGEM 3zf(+)作为载体构建了Gluconobactersp .S6基因文库 .结合转化子在以L 山梨糖为唯一碳源培养基上的生长情况 ,利用PCR技术筛选到一个含L 山梨糖还原酶基因的阳性克隆pGEM 3zf(+) sr3/E .coli,酶切鉴定插入片断长度约 5 .0kb左右 .以 pGEM 3zf(+) sr3/E .coli质粒DNA为模板 ,扩增SR结构基因 .PCR产物经测序验证为SR基因序列后 ,与表达载体Pet32a(+)相连 ,转化宿主大肠杆菌AD4 94 (DE3)对SR基因进行表达 ,并利用重金属离子亲和层析技术对SR融合蛋白进行了纯化 ,对其酶学特性进行了研究 .结果表明 :还原型辅酶II(NADPH)是SR酶蛋白的最适电子供体 ;SR酶蛋白的最适反应pH为 7.0 ,pH为6 .5时保持稳定 ,酶活力较高 ;最适反应温度是 5 0℃ ,30℃时热稳定性较好 .SDS PAGE电泳分析 ,SR融合蛋白的Mr 在6 5× 10 3 左右 ,由此推测出天然SR的Mr 在 5 3× 10 3 左右 ,与SR基因序列推测出的分子量大小一致 .图 13表 2参 6 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2011-05-05 |
| 源URL | [http://210.72.129.5/handle/321005/47246]  |
| 专题 | 沈阳应用生态研究所_沈阳应用生态研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 刘耀平,张丹,周亚凤,徐明凯,张成刚. L-山梨糖还原酶基因在大肠杆菌中的表达及融合蛋白的酶学特性[J]. 应用与环境生物学报,2004(03):413-419. |
| APA | 刘耀平,张丹,周亚凤,徐明凯,张成刚.(2004).L-山梨糖还原酶基因在大肠杆菌中的表达及融合蛋白的酶学特性.应用与环境生物学报(03),413-419. |
| MLA | 刘耀平,张丹,周亚凤,徐明凯,张成刚."L-山梨糖还原酶基因在大肠杆菌中的表达及融合蛋白的酶学特性".应用与环境生物学报 .03(2004):413-419. |
入库方式： OAI收割
来源：沈阳应用生态研究所
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