活化的凝血因子X制备的新方法和抑制剂的研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 赵超 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2000-03-01 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 授予地点 | 北京 |
| 导师 | 彭安 |
| 关键词 | 凝血因子X 活化的凝血因子X EGCG 分离纯化 抑制 剂 茶叶 抗肿瘤迁移。 |
| 学位专业 | 环境科学 |
| 中文摘要 | 现代生态经济思路之一，是充分利用废弃物或极低价值的资源进行高附加值的科技转化，从而达到资源的高度利用和社会效益与经济效益的结合。牛血作为生牛肉和生牛革生产中的废弃物，在我国一直没有得到充分开发和利用，浪费了这一可贵的资源。牛血中含有很多附加值极高的酶原，而这些酶的应用与现代生物工程和医药开发有紧密关系。酶的选择催化功能正在被深入的研究和认识，而围绕其开发的新产品在近几十年已被高度评价。心血管疾病的新药和抗凝抗血栓新药的研制开发，亟需这方面生物制剂和研究新理论的支持，而这类药物的应用前景已被国内外科学家普遍认为是最有市场潜力的。在我国心血管疾病的死亡人数始终居第一位，加之人口众多，深入这方面的研究，符合我国当前环境与健康的需要。本研究以牛血为原料，经过现代生物技术的分离纯化和检测，获得了电泳纯水平的活化的凝血因子X产品。这一产品填补了我国在酶制剂方面的空白，而且在成本控制和制备效率上，均优于文献报道的水平，是一条可以转化为生产的技术路线。在纯化方法的研究中，同时考虑到凝血酶纯化的需要，使该方法在Q．Sepharose处理活性凝血因子X组分前，技术路线的价值提高。在实验中，使用超滤技术的方式将会对酶活性带来不同的影响，离心超滤方式可以更高的保留酶活性，并且操作简便，温度易于调控。我们获得了相互关联的四项专利技术，形成了一套自有的知识产权成果，并为该领域的深入研究和开发打下了一个较为全面的基础。 血液中存在的许多种酶都是人类非常感兴趣的，凝血系统中的酶原、酶和辅酶也不例外。凝血酶和活化的凝血因子X是这些研究热点中的两个有代表性的酶，二者在凝血的瀑布式生化反应系统中扮演着重要的角色，二者的高效抑制剂也成为现代心血管抗凝、抗血栓药物的重点寻找目标。展开对它们的研究，除了要活化的凝ffIL因子x制备新方法和抑制剂的研究将它们从血液中提取到极纯的程度，还必须寻找动植物中高度专一的抑制剂，这是一个国内外都难度很大的研究。而从植物中寻找到活化的凝血因子X的抑制剂，特别是高度专一的抑制剂，在国内外未见报道。 本论文利用自己制备的活化的凝血因子X，不仅在茶叶中筛选到具有活化的凝血因子X高度专一的抑制剂组分，而且确定了该组分中的化合物EGCG(表儿茶酚没食子酸酯)是表现这种活性的抑制剂，并且浓度水平在0．5．1．0 p mole／L时，就有了抑制活性的表现。EGCG的专一性水平是通过对凝血酶的抑制进行评价的，实验结果证明，它对凝血酶的抑制活性很低，约比抑制活化的凝血因子X活性低二个数量级，是一个高度选择性的抑制剂。 小分子化合物具有专一性抑制活性的报道在国内文献中尚未见刊载，在国际上也十分罕见。小分子专一性抑制剂提供给药物分子设计研究人员一个不依赖复合晶体研究结构和性能的范例，它将极大降低新药开发的成本和周期。 本研究通过寻找活化的凝血因子X抑制剂，以及寻找到的EGCG具有高度专一抑制活性和抗肿瘤细胞迁移的活性，我们提出一个抗肿瘤细胞迁移的机理，即专一抑制活化的凝血因子X具有抗肿瘤迁移的活性。这一结论不仅可以通过另一专一抑制活性的蛋白antistasin佐证，更是Falanga研究发现肿瘤细胞在血液中可非正常地活化凝血因子X给予支持。这一机理同时解释了绿茶抗癌的机制，并且对红茶抗癌效果明显低于绿茶进行了分析。国际科学界近二年在((Nature》杂志上关于绿茶抗癌机制争论的十分热烈，但没有提出一个另人满意的解释，我们认为本研究提出的这一新机制比目前己提出的机制有更好的分子水平和更高的科学依据。 我们在论文中，对RVV．X活化凝血因子X的过程进行了电泳分析，得出二个中间态在稳定性方面的不同：脱除降解肽的FX B比脱除活化肽的FXa。稳定性低很多，更容易转化为FXa o。在活化反应的初期，我们分析两条路径是彼此竞争的，这一看法与文献报道的结论有所不同，论文中对此进行了讨论。论文工作还利用离子色谱结合安培检测器对糖肽进行了一些检测实验，认为有可能这种方法是糖肽检测的一种有效手段，尚待进一步工作给予系统评价。 将活化的凝血因子X与Os—II联合使用，在活化的前六个小时，比单独使用Os—II，凝血酶的活性提高1．5倍，完成活化的时间比单独使用Os—II缩短一倍以上，约在8小时左右。在制备凝血酶的工艺中，具有其它活化方法不能替代的优势，因此有很高的应用价值。 |
| 学科主题 | 环境化学 |
| 公开日期 | 2011-10-21 |
| 源URL | [http://159.226.240.226/handle/311016/1346]  |
| 专题 | 生态环境研究中心_环境化学与生态毒理学国家重点实验室 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 赵超. 活化的凝血因子X制备的新方法和抑制剂的研究[D]. 北京. 中国科学院研究生院. 2000. |
入库方式： OAI收割
来源：生态环境研究中心
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