环境雌激素生物标志物卵黄蛋白原的分析检测及应用研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 邵晶 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2005-06-01 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 授予地点 | 北京 |
| 导师 | 江桂斌 |
| 关键词 | 环境雌激素 生物标志物 卵黄蛋白原：酶联免疫吸附法 泥鳅 MVLN 天津海河 野生鱼类 |
| 学位专业 | 环境科学 |
| 中文摘要 | 卵黄蛋白原(V增)是一种灵敏的雌激素或类雌激素效应生物标志物。本论文以分析检测卵黄蛋白原为研究手段，将室内模拟暴露和实际环境调查相结合，同时利用MVLN体外细胞实验作为辅助，研究水环境中某些化合物的雌激素活性。 通常，只有发育成熟的雌鱼在肝脏中产生Vtg，并释放到血液中去：雄鱼体内并不合成Vtg，但是在雌激素或类雌激素的诱导下，雄鱼的肝脏也会合成Vtg，因此通过检测雄鱼体内Vtg的异常升高可以指示水环境中雌激素物质的污染。本论文尝试利用泥鳅作为模型动物，利用抗原抗体之间的特异性反应，建立了竞争酶联免疫吸附法(ELISA)定量测定泥鳅血清中的卵黄蛋白原。该方法具有灵敏度高、特异性好的优点。其检测限可达5．7ng／mL，标准曲线工作范围为15．6．1000 ng／mL，板内和板间变异系数分别为6．9％和10．4％，回收率为104．4％。通过检测雌激素(E2和EE2)诱导泥鳅以及野生泥鳅血清中的Vtg含量对该方法进行了验证。实验结果表明，我们可以用建立的方法来检测泥鳅血清中的卵黄蛋白原，以此作为生物标志物监测环境中雌激素或类雌激素的污染。 利用室内模拟暴露实验对泥鳅作为雌激素效应的模型动物进行了初步探讨。检测典型雌激素化合物(E2，OP和BPA)暴露下泥鳅体内Vtg的含量变化，评估了这几种化合物的雌激素活性。体内实验结果显示，三种化合物暴露均可以导致泥鳅体内Vtg的异常升高。其中，E2具有明显的雌激素效应，在很短时间内就能诱导雄性泥鳅体内Vtg的显著升高(p<0．05)，呈现出时间累积效应和剂量．效应关系；OP和BPA雌激素活性相对较弱，只在高浓度(1000~g／L)条件下，泥鳅体内Vtg浓度显 著高于对照组，并且BPA比OP表现出更高的雌激素活性。病理学组织切片显示，暴露组肝脏和性腺均可观察到明显的组织病变，肝脏受到了损伤，生精受到不同程度的抑制，但没有呈现剂量效应关系；此外，对泥鳅进行污水暴露实验，同对照组相比泥鳅体内Vtg浓度没有显著性差异。污水暴露组组织切片病变不明显，但是肝脏和性腺也有一定程度的损伤。研究结果表明，泥鳅可以作为模型动物研究化合物的雌激素效应。同时，我们利用MVLN(人乳腺癌细胞MCF-7细胞系)体外细胞实验测定了E2、E1、oP、NP和BPA的雌激素活性。结果显示，这几种化合物都能够引起MVLN细胞的响应，其雌激素活性大小顺序为E2>E1>OP>NP>>BPA。结果表明，虽然体外细胞实验是一种快速有效的雌激素预筛选方法，可对化合物的雌激素活性进行预测，但在某些条件下，MVLN试验结果并不能准确反映化合物在体内的实际雌激素效应。 了解具有统计学意义的泥鳅体内Vtg含量随季节性繁殖周期的变化以及其它生理学指标与Vtg的相关关系，有助于准确判断该种动物是否受到了环境雌激素的污染。利用ELISA方法对北京市场上销售的泥鳅体内Vtg含量进行测定，研究发现，泥鳅体内Vtg含量具有很高的检出率(雌性泥鳅高达100％，雄性泥鳅检出率接近50％)，雌性体内Vtg含量显著高于同期采集的雄性泥鳅，其性肉指数(GSI)和Vtg变化趋势相同， 而肝肉指数(HIS)和Vtg变化趋势相反，但是GSI和HSI与Vtg的相关性并不明显。雌性泥鳅体内Vtg与该鱼类季节性繁殖周期的变化比较一致，雄性泥鳅体内有少量的Vtg存在，可能在泥鳅摄取的食物中含有雌激素类物质的污染。 以卵黄蛋白原作为生物标志物，对我国的广大水域的雌激素类化合物污染状况进行实地考察更具有实际意义。我们以野生鱼血清中的Vtg为生物标志物，首次对天津海河地区(子牙河和海河入海口)部分水域中雌激素类污染物进行了初步研究。在不同采样时间，不同采样点的野生雌鱼和雄鱼血清中都有较高浓度的Vtg检出，表明这些水体中存在一定程度的雌激素类化合物的污染。此外，在采样点水体中还检测到一定浓度的OP、NP和BPA，其浓度远低于文献中报道的导致鱼Vtg生成的最低显效浓度。 |
| 学科主题 | 环境化学 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2011-12-15 |
| 源URL | [http://ir.rcees.ac.cn/handle/311016/2176]  |
| 专题 | 生态环境研究中心_环境化学与生态毒理学国家重点实验室 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 邵晶. 环境雌激素生物标志物卵黄蛋白原的分析检测及应用研究[D]. 北京. 中国科学院研究生院. 2005. |
入库方式： OAI收割
来源：生态环境研究中心
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