微点阵免疫芯片同步多元分析方法的研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 宋世平 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2004 |
| 授予单位 | 中国科学院上海应用物理研究所 |
| 授予地点 | 中国科学院上海应用物理研究所 |
| 导师 | 胡钧 |
| 关键词 | 免疫芯片 微点阵 同步多元分析 肿瘤标志蛋白 抗体片断 第二识别系统 生物素一亲和素系统 |
| 其他题名 | The Study of Simultaneous Multianalysis Method Based on Microarray Immunochip |
| 学位专业 | 无机化学 |
| 中文摘要 | 免疫芯片是一种检测用蛋白芯片，它以捕获探针微点阵为基础，结合超灵敏的检测仪器，可以建立高灵敏、高特异、高通量的同步多元检测系统。这一系统既可用于临床生物样品的免疫检测，又可用于基因表达蛋白质的性质分析，在分子诊断学和蛋白质组学研究及应用领域有着广阔的发展前景。本论文以醛基化玻片为芯片基片，抗体或抗体片断作为捕获探针，应用自动点样仪制作了含有多种捕获探针的微点阵免疫芯片。每组微点阵所占面积为0.4cm ×1.4cm一0.75cm × 1.4cm：每个微点的直径约为，150μm；并确定了捕获探针与基片上活化基团之间实现连接的各项反应条件。应用高特异检测探针对芯片上捕获探针的生物活性进行检测，得到了均一、稳定的成像结果，表明本免疫芯片具有良好的捕获性能。以此免疫芯片为捕获系统，选用荧光标记物为检测系统，并以夹心免疫分析为反应构型，建立了同时检测多种靶蛋白的微型化同步多元分析方法；优化了实现分析所需的的各项反应条件，确定了方法的基本技术指标；本方法灵敏度为12ng／mL，同时成像结果呈现出很好的特异性；应用本分析方法检测了一定数量的生物样品，并与传统分析方法（如放射免疫分析方法和免疫放射分析等）所钡l得的数据进行对比分析，结果表明，本方法与经典分析方法具有良好的相关性。本论文在具体实验中采用了多种肿瘤标志蛋白的单克隆抗体或抗体片断作为捕获探针，以FITC荧光素标记的亲和素为检测探针，可以实现最多六种已知肿瘤标志蛋白的同步分析。为了统一芯片上各微点阵的检测系统，在分析构型中引入了抗种属免疫球蛋白抗体作为第二识别分子；进而为了增强检测性能，还引入了生物素一亲和素作为信号放大系统，提高了信噪比。本论文选用了单克隆抗体片断F（ab'）2作为捕获探针，使芯片的多项性能指标得以进一步提高：（1）增加了单个微点面积内探针的数量；（2）因为探针分子的稳定区（Fc区）已被切除，从而减少了后续分析中的非特异性反应；（3）有利于引入第二识别系统以提高分析特异性和实现检测探针的统一性。从本论文实验内的数据比较和与文献报道结果比较，以F（ab'）2为捕获探针的免疫芯片在同步多元分析的灵敏度和特异性方面均有较为明显的提高。本论文所获取的实验结果和技术数据可为蛋白质芯片的深入研究提供真实可靠的实验依据；所制备的微点阵免疫芯片及所建立的同步多元分析方法既适用于分子诊断学中同系列标志物（肿瘤标志物、内分泌激素及过敏原等）的同步多元分析，也适用于蛋白质组学，尤其是临床蛋白质组学中生物标志物的筛选和鉴定等。本论文的创新要点主要有：制备了以抗体片断F（ab'）2为捕获探针的微点阵免疫芯片；在芯片中引入了第二识别系统和统一检测探针；实现了六种肿瘤标志蛋白的同步多元分析。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2012-04-11 |
| 页码 | 55 |
| 源URL | [http://ir.sinap.ac.cn/handle/331007/7389]  |
| 专题 | 上海应用物理研究所_中科院上海应用物理研究所2004-2010年 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 宋世平. 微点阵免疫芯片同步多元分析方法的研究[D]. 中国科学院上海应用物理研究所. 中国科学院上海应用物理研究所. 2004. |
入库方式： OAI收割
来源：上海应用物理研究所
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