α-synuclein蛋白积聚的分子机制：GAV基序和无规卷曲结构
文献类型：学位论文
| 作者 | 吉丽娜 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2004 |
| 授予单位 | 中国科学院上海应用物理研究所 |
| 授予地点 | 中国科学院上海应用物理研究所 |
| 导师 | 胡钧 |
| 关键词 | 神经退行性疾病 蛋白质积聚 GAV基序 宿主蛋白质 嵌合体蛋白质 固相圆二色谱 过氧化氢 |
| 学位专业 | 无机化学 |
| 中文摘要 | α-突触核蛋白（α-synuclein，α-Syn）是帕金森症患者脑中Lewy体和Lewy神经突的主要成分。与Aβ肽（β-amyloid peptide）和PrP（prion protein）一样，α-Syn在体内和体外都易于积聚生成纤维。在Aβ肽、PrP和α-Syn等蛋白质中都存在一段疏水性的同源序列vGGAVVAGV，即GAv基序。通过基因突变的方法，我们获得了一系列份Syn的突变型蛋白质，并利用ThT荧光检测、原子力显微镜成像以及圆二色谱研究了它们的积聚性质。实验证明GAV基序在份Syn的纤维化过程中发挥了极其重要的作用，而且其内部Gly、Ala和Val三种氨基酸的间隔排列在一定程度上有利于蛋白质积聚形成纤维。将具有无规卷曲结构的γ-synuclein中的66-74位氨基酸序列突变成GAV基序，从而得到突变型蛋白质γ-GAV。将GAV基序分别插入到具有紧密折叠结构的硫氧化还原蛋白结构域（tllioredoxin，TRX）和蛋白质G IgG结合结构域（IgG-binding B1 domain of proteinG，PGBD）的中部Ioop区域或C-端，得到四个嵌合体蛋白质。研究以上蛋白质的积聚性质，发现只有γ-GAV蛋白能够积聚形成纤维，并且伴随着β-折叠结构的形成。而对于稳定性很强的宿主蛋白质TRX和PGBD，GAV基序的引入不足以使其从可溶状态转变为纤维化积聚物。这一结果说明虽然GAV基序有可能引发其所在宿主蛋白质的积聚，但是积聚能否发生还与该序列所处的宿主蛋白质的结构有关。应用圆二色谱研究了几种不同结构类型蛋白质在固相时的二级结构，并与其液相中的结构进行了比较。结果表明，蛋白质在固相化过程中的结构转换与该蛋白质的二级结构有关。采用检出限为5nMH_2O_2的荧光分光法来测定α-Syn的积聚过程中产生的H2O2，发现即使在加入Fe（IID或Cu（II）的情况下也没有H2O2生成。这一结果将有助于我们深入阐明导致蛋白质积聚物神经毒性的潜在机制。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2012-04-11 |
| 页码 | 81 |
| 源URL | [http://ir.sinap.ac.cn/handle/331007/7407]  |
| 专题 | 上海应用物理研究所_中科院上海应用物理研究所2004-2010年 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 吉丽娜. α-synuclein蛋白积聚的分子机制：GAV基序和无规卷曲结构[D]. 中国科学院上海应用物理研究所. 中国科学院上海应用物理研究所. 2004. |
入库方式： OAI收割
来源：上海应用物理研究所
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