烯酮还原酶基因的克隆与优化表达
文献类型：期刊论文
| 作者 | 吕 彤 ; 刘 扬 ; 赵青 ; 任 杰 ; 王 敏 ; 吴洽庆 ; 朱敦明 |
| 刊名 | 应用与环境生物学报
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| 出版日期 | 2011-02-25 |
| 卷号 | 17期号:1页码:087-090 |
| 关键词 | 烯酮还原酶 优化表达 不对称还原 C=C双键 丙酮丁醇梭菌 |
| 中文摘要 | 烯酮/酯还原酶可以专一性地还原烯酮/酯中的碳碳双键，并引入两个手性中心，是手性化合物生物催化合成的重要酶类之一；在使用烯酮/酯还原酶进行全细胞手性分子生物催化合成中，其他还原酶的存在常导致副反应的产生. 为研究烯酮/酯还原酶的理化性质、底物的专一性、产物的手性特点等，需要经过纯化的烯酮/酯还原酶. 为此，根据烯酮还原酶（Enoate reductase，ERs，EC 1.3.1.31）的基因序列设计引物，以丙酮丁醇梭菌（Clostridiumacetobutylicum）ATCC824 基因组DNA为模板，通过PCR扩增技术得到了目标酶的基因，目的片段全长为1 995 bp，共编码664个氨基酸，相对分子质量为73×103. 将烯酮还原酶基因连接到pET-32a(+)上，构建表达质粒pET-32a（+）-ERs，并成功在Escherichia coli Rosetta（DE3）pLysS中表达. 在摇床上优化的表达条件为：诱导温度为18 ℃，诱导起始时菌体D600 nm为0.6~0.8，转速为100 r/min，诱导剂IPTG浓度为0.1 mmol/L，诱导培养时间为12 h，表达的烯酮还原酶大部分以可溶性形式存在于菌体内. 图5 参16 |
| 公开日期 | 2011-08-17 |
| 源URL | [http://124.16.173.210/handle/0/97]  |
| 专题 | 天津工业生物技术研究所_生物催化与绿色化工 朱敦明_期刊论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 吕 彤,刘 扬,赵青,等. 烯酮还原酶基因的克隆与优化表达[J]. 应用与环境生物学报,2011,17(1):087-090. |
| APA | 吕 彤.,刘 扬.,赵青.,任 杰.,王 敏.,...&朱敦明.(2011).烯酮还原酶基因的克隆与优化表达.应用与环境生物学报,17(1),087-090. |
| MLA | 吕 彤,et al."烯酮还原酶基因的克隆与优化表达".应用与环境生物学报 17.1(2011):087-090. |
入库方式： OAI收割
来源：天津工业生物技术研究所
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