黑曲霉糖化酶基因的克隆及其在比赤酵母菌X33中的表达
文献类型：期刊论文
| 作者 | 曹慕琛 ; 徐健勇 ; 罗立超 ; 张同存 ; 孙邵靖 ; 宋诙 |
| 刊名 | 安徽农业科学
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| 出版日期 | 2011 |
| 卷号 | 39期号:14页码:8226-8230 |
| 关键词 | 毕赤酵母 糖化酶 热稳定性 异源表达 |
| 中文摘要 | 以毕赤酵母( Pichia pastoris) X33 为宿主菌高效表达黑曲霉( Aspergillus niger) 糖化酶，为进一步扩大糖化酶在工业上的应 用奠定基础。［方法］利用RT-PCR 技术，提取黑曲霉总RNA 进行反转录，以得到的cDNA 为模板，根据NCBI 数据库中A． niger CBS 513.88糖化酶的cDNA 序列( glaA) 设计引物，通过PCR 扩增得到去除天然信号肽的糖化酶成熟肽编码基因glaAm，并将其克隆到pUC19 载体中，序列分析表明，glaAm 的开放阅读框由1879 个核苷酸组成，编码625 个氨基酸。以此片段构建了pFLDα-glaAm 重组表达载体， 经Nsi I 线性化后，电击转化毕赤酵母X-33。摇瓶培养中通过添加终浓度为0.5% 的甲醇诱导糖化酶的分泌。［结果］SDS-PAGE 和 Starch-PAGE 显示，糖化酶得到正确的分泌表达，且具有较高的生物活性，发酵上清液中酶活最高达到380.78 U/ml( 发酵液) 。重组糖化 酶的最适反应温度和最适pH 分别为60 ～ 65 ℃和4.0，在pH 2.5 ～ 5.5 范围内均保持90%以上的酶活力。该酶具有较高的热稳定性， pH 4.0 条件下，该酶在50 ℃下稳定; 60 ℃处理60 min，仍能保持90%以上的酶活力; 65 ℃下的半衰期约为44 min。［结论］黑曲霉糖化 酶基因在毕赤酵母X33 中得到了异源高效表达。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2011-08-18 |
| 源URL | [http://124.16.173.210/handle/0/118]  |
| 专题 | 天津工业生物技术研究所_基因工程与微生物应用技术研究组 宋恢_期刊论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 曹慕琛,徐健勇,罗立超,等. 黑曲霉糖化酶基因的克隆及其在比赤酵母菌X33中的表达[J]. 安徽农业科学,2011,39(14):8226-8230. |
| APA | 曹慕琛,徐健勇,罗立超,张同存,孙邵靖,&宋诙.(2011).黑曲霉糖化酶基因的克隆及其在比赤酵母菌X33中的表达.安徽农业科学,39(14),8226-8230. |
| MLA | 曹慕琛,et al."黑曲霉糖化酶基因的克隆及其在比赤酵母菌X33中的表达".安徽农业科学 39.14(2011):8226-8230. |
入库方式： OAI收割
来源：天津工业生物技术研究所
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