珠子草多酚抗乙型肝炎病毒和实验性肝损伤的药效学及HPLC指纹图谱研究
文献类型：学位论文
| 作者 | 李彩东 |
| 学位类别 | 理学博士 |
| 答辩日期 | 2012-05-17 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 导师 | 师彦平 |
| 关键词 | 珠子草 乙型肝炎病毒 肝损伤 高效液相色谱 指纹图谱 Phyllanthus niruri Linn hepatitis B virus hepatic injury HPLC fingerprint |
| 学位专业 | 分析化学 |
| 中文摘要 | 珠子草(Phyllanthus niruri Linn)为大戟科叶下珠属植物，是我国传统的中草药，主要分布于云南、广西、广东、海南等热带、亚热带地区，含黄酮类、木脂素类、生物碱类、鞣质等多种成分。具有平肝清热、利水解毒之功效，用于肠炎、肝炎、痢疾、尿路感染、无名肿痛等疾病的治疗，具有明显的抗乙型肝炎病毒活性及对肝损伤的保护作用，且毒副作用低，是一种值得深入开发的天然药物。但其发挥药效的物质基础尚不清楚，同时受产地、采收期、药用部位、加工方法等因素的影响，导致药材质量的明显差异，从而影响临床疗效。本博士论文采用HepG2.2.15细胞模型及鸭乙肝动物模型，评价珠子草多酚抗乙肝病毒的作用效果；采用四氯化碳造成小鼠急性实验性肝损伤模型，观察珠子草多酚保肝作用；同时应用HPLC法对珠子草药材指纹图谱进行了系统的研究，分析了不同地区或省份珠子草药材高效指纹图谱的相似性，建立珠子草药材标准指纹图谱，为珠子草植物药的开发应用提供理论依据。 主要研究结果如下： 1．选用HepG2.2.15细胞模型探讨了珠子草多酚（ZDF）体外抗乙型肝炎病毒（HBV）的作用。用ELISA法及荧光定量PCR法测定细胞培养上清HBsAg、 HBeAg和HBV DNA含量，以HBsAg、HBeAg和HBV DNA作为药物效果检测指标，并用MTT法检测药物细胞毒性。结果显示，珠子草多酚对细胞的毒性作用较小，对细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg和HBV DNA的分泌均有一定的抑制作用，且与剂量-时间成正相关。提示珠子草多酚体外有一定程度的抗HBV的作用。 2．采用人工感染鸭乙型肝炎病毒（DHBV）动物模型，研究了珠子草多酚体内抗鸭乙型肝炎病毒的的作用。在整个实验过程中，病毒对照组鸭体内病毒稳定持续在较高的水平；给予阳性对照药物拉米夫定治疗后，在第5天和第10天均表现出较强的抗病毒作用，用药后病毒水平下降较快，但停药3天后出现反跳。珠子草多酚高、中剂量组在用药第10天，血清中DHBV DNA均较给药前明显下降，低剂量组在给药期间未表现出明显抑制DHBV DNA的作用。提示珠子草多酚体内有抗HBV的作用，综合体内外初步的抗病毒研究结果提示，珠子草多酚具有一定的抗HBV作用。 3．采用四氯化碳（CCI4）诱导小鼠急性肝损伤模型，探讨了珠子草多酚的保肝作用。结果表明： 珠子草多酚能够明显降低CCI4致小鼠肝损伤ALT、AST增高，减轻肝细胞变性、炎症细胞浸润等病变，降低肝组织中MDA生成量，提高SOD活性，提高ALB的合成量和A/G值。提示ZDF具有明显的保肝护肝作用。 4．对不同产地的珠子草药材进行了系统的HPLC指纹图谱研究，分析了11个不同地区或省份的珠子草药材指纹图谱的相似性，为珠子草药材的质量控制提供一定的依据。确定9个共有峰构成珠子草药材的特征指纹图谱，不同产地的珠子草药材指纹图谱比较相似，各共有峰都存在，但色谱峰之间的相对峰面积并不相同，由此可以看出它们之间的内在质量是有区别的，体现了不同产地药材的差别。同时，确认了特征指纹图谱中的四个特征峰： 1号峰为原儿茶酸，2号峰为咖啡酸，5号峰为柯里拉京，8号峰为鞣花酸。使用计算机辅助相似度评价软件对不同产地的珠子草药材进行了相似度分析。结果表明：除5号药材(采自广西南宁)，8号药材(采自甘肃武都) 相似度较低外，其它各产地药材的相似度基本上在0.9左右。 5．建立了珠子草药材有效成分咖啡酸含量的HPLC测定方法。在0.122~0.610mg/g浓度范围内，咖啡酸的色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系，回归方程为：Y=4.786×107 X+165969.46，相关系数=0.9990，加样回收率为100.06%。实验结果显示，不同产地珠子草药材咖啡酸含量差异较大，平均为0.40%，产地云南景洪的含量最高为0.68%，其次为云南孟腊0.60%，含量最低的是广西南宁为0.20%，明显低于其它各产地，约为最高量的1/3。 6．建立了珠子草药材中总多酚含量的紫外分光光度测定方法。在0.5274～1.5822μg/ mL范围内没食子酸浓度与吸光度呈良好线性关系，回归方程为C=2.7516A-0.0925，相关系数为0.9983，珠子草总多酚平均含量为3.07%。该方法简便、快速、灵敏度高。 |
| 公开日期 | 2013-04-02 |
| 源URL | [http://210.77.64.217/handle/362003/2880]  |
| 专题 | 兰州化学物理研究所_中科院西北特色植物资源化学重点实验室/甘肃省天然药物重点实验室 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 李彩东. 珠子草多酚抗乙型肝炎病毒和实验性肝损伤的药效学及HPLC指纹图谱研究[D]. 中国科学院研究生院. 2012. |
入库方式： OAI收割
来源：兰州化学物理研究所
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